[发明专利]止血材料

说明书

本发明涉及止血材料(诸如伤口敷料)以及形成此类材料的方法。本发明还涉及将肽缀合至基底的方法。

氧化纤维素织物是已长期用于医学应用的生物可降解和可吸收的织物。其有利的特性包括高可吸收性、抗细菌和抗病毒特性以及无毒和抗粘附作用。

由于所述织物引起或加速其所施加的部位处的血液凝固的能力，氧化纤维素可用作止血材料。商业上可用的氧化纤维素织物的实例是(由Ethicon Inc.制造)。

然而，氧化纤维素织物具有若干缺点，包括差的止血特性、低生物可降解性和可灭活酸敏感性蛋白质(诸如凝血酶、白蛋白和球蛋白)的低pH。

改性氧化纤维素并改进其特性的努力主要聚焦于中和所述材料的酸性。例如，欧洲专利EP 0659440 B1描述了使用钙或钙与钠或钾的组合处理氧化纤维素。然而，需要进一步改进氧化纤维素的止血特性。

SPOT合成是在纤维素膜上进行的固相肽合成的已建立方法，并且常用于制备肽阵列(Hilpert,K.、Winkler D.F.H、Hancock,R.E.W.(2007)Cellulose-bound Peptide Arrays:Preparation and Applications,Biotechnology and Genetic Engineering Reviews,24:1,31-106)。纤维素是具有游离羟基的多糖。为了制成适用于合成肽的纤维素，必需将官能性从羟基改变成反应性更大的氨基。最简单和常用的纤维素膜的衍生化是使用Fmocβ-丙氨酸或Fmoc-Gly和N,N’-二异丙基碳化二亚胺进行的酯化。

然而，氧化纤维素的结构与纤维素的不同之处在于氧化纤维素基底在其表面上具有羧基。

氧化纤维素不适用于肽(尤其是具有游离N-端的肽)的常规SPOT合成。这是因为在氨基酸的氨基与氧化纤维素的羧基之间发生反应。

SPOT合成的另一个缺点是在所有偶合阶段由于重复的固相结合羧基活化而引起的增加的差向异构化风险。

本申请人已设计一种将肽缀合至基底(诸如氧化纤维素)的更有效方法并且出乎意料地发现如果将纤维蛋白原结合肽共价连接至氧化纤维素基底，则止血特性得到适当的改进。

在广义上，本发明涉及肽(诸如纤维蛋白原结合肽)到基底的共价固定以及将此类肽共价固定至基底的方法。

本发明的方法涉及提供包含肽和第一反应基团的部分；提供具有第二反应基团的基底；以及使所述第一反应基团与所述第二反应基团反应以将肽共价连接至基底。

此方法与常规SPOT合成相反，其中肽在羧基至氨基方向中合成同时C-端固定至基底。换言之，SPOT肽合成在基底上发生。常规SPOT合成可适用于在纤维素基底上制成肽阵列，但是其对于将肽连接至基底(诸如伤口敷料)可能是不实际且不经济的。例如，首先合成肽之后将所述肽缀合至所述基底可使得更容易表征和控制材料的纯度。

本发明的方法包括对SPOT合成的修改，其适用于SPOT合成可能不适用的具有羧基的基底，诸如氧化纤维素。具有羧基的其他基底的实例包括淀粉、糖原、右旋糖酐、半纤维素、果胶、透明质酸、脱乙酰壳多糖、明胶、胶原以及丝。

根据本发明，提供一种将肽共价固定至基底的方法，其包括：提供下述部分，其中每个部分包含肽和羧基反应基团形式的第一反应基团(或部分反应基团)；提供包含羧基形式的第二反应基团(或基底反应基团)的基底；以及使所述第一反应基团与所述第二反应基团反应以将所述肽共价固定至所述基底。

在优选的实施方案中，所述基底是或者包括基于纤维素的基底，诸如氧化纤维素，最优选地是再生氧化纤维素。

所述部分优选地包含纤维蛋白原结合肽。

优选地，所述方法涉及将多个肽共价固定至所述基底。

根据本发明，提供一种制成止血材料或药剂的方法，其包括将多个纤维蛋白原结合肽共价固定至氧化纤维素基底。

在一些实施方案中，所述方法包括：提供包含纤维蛋白原结合肽和羧基反应基团形式的第一反应基团的部分；提供包含羧基形式的第二反应基团的氧化纤维素基底；以及使所述第一反应基团与所述第二反应基团反应以将所述肽共价固定至所述基底。

优选地，所述第一反应基团是氨基，使得第一反应基团与第二反应基团的反应形成酰胺键。

在一个优选的实施方案中，所述肽通过所述肽的C端共价固定至基底。