[发明专利]聚合酶变体及其用途

权利要求书

1.一种具有DNA聚合酶活性的经修饰的DNA聚合酶，其包含与SEQ ID NO:1或2所示的氨基酸序列具有至少70％序列同一性的氨基酸序列，所述氨基酸序列包括选自以下的一个或多个氨基酸取代：H223、N224、Y225、H227、I295、Y342、T343、I357、S360、L361、I363、S365、S366、Y367、P368、D417、E475、Y476、F478、K518、H527、T529、M531、N535、G539、P542、N545、Q546、A547、L549、I550、N552、G553、F558、A596、G603、A610、V615、Y622、C623、D624、I628、Y629、R632、N635、M641、A643、I644、T647、I648、T651、I652、K655、W656、D657、V658、H660、F662、L690或其组合。

2.权利要求1的经修饰的DNA聚合酶，其中所述取代选自：H223A、N224Y/L/Q/M/R/K、Y225L/T/I/F/A/M、H227P/E/F/Y、I295W/F/M/E、Y342L/F、T343N/F、I357G/L/Q/H/W/M/A/E/Y/P、S360G/E/Y、L361M/W/V/F、I363V/A/R/M/W、S365Q/W/M/A/G、S366A/L、Y367L/E/M/P/N/F、P368G、D417P、E475D、Y476V、F478L、K518Q、H527W/R/L/Y/T/M、T529M/F、M531H/Y/A/K/R/W/T/L/V/G、N535L/Y/M/K/I/R/W/Q、G539Y/F、P542E/S/G、N545K/D/S/L/R/Q/W、Q546W/F、A547M/Y/W/F/V/S、L549Q/Y/H/G/R/K、I550A/W/T/G/F/S、N552L/M/S/T、G553S/T/E/Q/K/R/M、F558P/T、A596S、G603T/A/L、A610T/E、V615A/T、Y622A/M、C623G/S/Y/F、D624F/K、I628Y/V/F/L/M、Y629W/H/M/K、R632L/C、N635D、M641L/Y、A643L、I644H/M/Y、T647G/A/E/K/S/Y、I648K/R/V/N/T/L、T651Y/F/M、I652Q/G/S/N/F/T/A/L/E/K/M、K655G/F/E/N/Q/M/A、W656E、D657R/P/A/E、V658L、H660A/Y、F662I/L、L690M及其组合。

3.权利要求1的经修饰的DNA聚合酶，其中所述经修饰的聚合酶相比亲本聚合酶具有改变的特征。

4.权利要求3的经修饰的DNA聚合酶，其中所述改变的特征选自保真度、持续合成能力、延伸率、稳定性、溶解度和结合和/或掺入多磷酸核苷酸的能力，所述多磷酸核苷酸为诸如四磷酸、五磷酸、六磷酸、七磷酸或八磷酸核苷酸。

5.权利要求3的经修饰的DNA聚合酶，其中改变的特征是将具有4、5、6、7或8个磷酸的核苷酸多磷酸掺入生长中的DNA链中的能力。

6.权利要求5的经修饰的DNA聚合酶，其中所述核苷酸多磷酸是经标记的。

7.权利要求1的经修饰的DNA聚合酶，其中所述经修饰的聚合酶具有对应于S366A/L的取代。

8.权利要求1的经修饰的DNA聚合酶，其中所述经修饰的聚合酶具有对应于E475D的取代。

9.权利要求1的经修饰的DNA聚合酶，其中所述经修饰的聚合酶具有对应于F478L的取代。

10.权利要求1的经修饰的DNA聚合酶，其中所述经修饰的聚合酶具有对应于K518Q的取代。

11.权利要求1的经修饰的DNA聚合酶，其中所述经修饰的聚合酶具有对应于T529M的取代。

12.权利要求1的经修饰的DNA聚合酶，其中所述经修饰的聚合酶具有对应于N535L的取代。

13.权利要求1的经修饰的DNA聚合酶，其中所述经修饰的聚合酶具有对应于N545K/L的取代。

14.权利要求1的经修饰的DNA聚合酶，其中所述经修饰的聚合酶具有对应于A547F的取代。