[发明专利]核酸的分离有效
申请号: | 201680028490.3 | 申请日: | 2016-03-17 |
公开(公告)号: | CN107743521B | 公开(公告)日: | 2021-01-08 |
发明(设计)人: | 斯蒂芬·约翰·敏特;乔尔乔斯·派特索斯 | 申请(专利权)人: | 雷沃卢金有限公司 |
主分类号: | C12N15/10 | 分类号: | C12N15/10;C12Q1/6806 |
代理公司: | 中科专利商标代理有限责任公司 11021 | 代理人: | 柳春琦 |
地址: | 英国*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 核酸 分离 | ||
1.从生物材料分离包含DNA的核酸的方法,所述方法包括下述步骤:
(i)用水溶液实施所述生物材料的裂解,以产生水性的裂解的组合物,所述水溶液包含浓度为0.05-1.0M的锂盐、螯合剂和表面活性剂,
(ii)在存在浓度为0.05-2M的溶解的离液剂和25体积%-60体积%的溶解的C1-3链烷醇液体的条件下,用固体载体处理所述裂解的组合物,所述固体载体能够固定DNA,
(iii)将所述固体载体与液体分离,
(iv)用包含浓度为0.05-1M的锂盐的第一洗涤溶液处理所述固体载体,所述第一洗涤溶液包含20体积%-90体积%的溶解的C1-3链烷醇,
(v)将所述固体载体与所述第一洗涤液分离,
(vi)用第二洗涤液处理所述固体载体,所述第二洗涤液包含至少80体积%的C1-3链烷醇,如果存在余量的话,余量为水,
(vii)将所述固体载体与所述第二洗涤溶液分离,和
(viii)从所述固体载体上洗脱DNA。
2.权利要求1所述的方法,其中,在包含浓度为0.05-1.0M的锂盐、螯合剂和表面活性剂的所述水溶液中,所述锂盐的浓度小于1.0M。
3.权利要求2所述的方法,其中,在包含浓度为0.05-1.0M的锂盐、螯合剂和表面活性剂的所述水溶液中,所述锂盐的浓度为0.2-0.9M。
4.权利要求2所述的方法,其中,在包含浓度为0.05-1.0M的锂盐、螯合剂和表面活性剂的所述水溶液中,所述锂盐的浓度为0.2-0.8M。
5.权利要求1所述的方法,其中步骤(i)所述的水溶液基本上由下述组成:水,浓度为0.7-0.9M的氯化锂,浓度为5-15mM的EDTA或其钠盐和0.9-1.1重量%的SDS。
6.权利要求5所述的方法,其中在步骤(ii)中,所述离液剂是浓度为0.6-0.7M的胍氯化物,并且所述链烷醇是以所述液体的35-40体积%的量存在的乙醇。
7.权利要求1所述的方法,其中步骤(i)所述的水溶液基本上由下述组成:水,浓度为0.2-0.3M的氯化锂,浓度为1-5mM的EDTA或其钠盐,浓度为0.6-0.7M的胍氯化物,量为0.2-0.4重量%的SDS和35-40体积%的乙醇。
8.权利要求1-7中任一项所述的方法,其中所述第一洗涤液基本上由下述组成:水,浓度为0.3-0.6M的氯化锂和45体积%-55体积%的乙醇。
9.权利要求1-7中任一项所述的方法,其中所述第一洗涤液基本上由下述组成:水,浓度为0.6-1M的氯化锂和45体积%-55体积%的乙醇。
10.权利要求1-7中任一项所述的方法,其中所述第二洗涤液基本上由80体积%-95体积%的乙醇和水组成。
11.权利要求1-7中任一项所述的方法,其中所述固体载体包含二氧化硅。
12.权利要求1-7中任一项所述的方法,其中步骤(iii)在离心管中实施,在所述离心管中,所述固体载体是过滤器,并且步骤(iii)、(v)、(vii)和(viii)通过离心实施。
13.权利要求12所述的方法,其中所述过滤器包括硼硅酸盐玻璃纤维。
14.权利要求13所述的方法,其中在所述离心管中提供多个所述过滤器。
15.权利要求14所述的方法,其中提供四个过滤器。
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