[发明专利]核酸的分离

说明书

公开了从生物材料分离包含DNA的核酸的方法。所述方法包括使用水性组合物产生裂解的组合物的裂解步骤，所述水性组合物包含浓度为0.05‑1.0M的锂、螯合剂和表面活性剂。在存在浓度为0.05‑2M的溶解的离液剂和25体积％‑60体积％的C_1‑3链烷醇的条件下，将所述裂解的组合物用能够固定DNA的固体载体处理。然后将所述载体用包含溶解在C_1‑3链烷醇中的锂的第一洗涤溶液洗涤。随后，将所述载体用包含至少80体积％的C_1‑3链烷醇的液体洗涤。然后，从所述载体上洗脱包含DNA的核酸。

本发明涉及从生物材料(例如，细胞)中分离包含DNA的核酸，其利用裂解工序并且处理裂解物而分离包含DNA的核酸。更具体地，本发明包括将来自裂解的生物材料的包含DNA的核酸固定在固体载体上，纯化在所述载体上的包含DNA的核酸，然后从所述载体上洗脱所述包含DNA的核酸以用于收集。本发明的具体目的是提供一种相对快速且直接实施的并且以良好的产率产生高纯度的包含DNA的核酸的方法。本发明还涉及用于所述裂解工序的组合物。

在众多领域中，例如，研究和临床诊断中，从生物材料(例如，细胞)分离纯的、完整的包含DNA的核酸是重要的。由此，纯粹通过举例的方式，临床上来自患者的包含细胞的样品可以进行工序处理(包括细胞裂解的步骤)，以分离包含DNA的核酸，然后将其通过本领域公知的工序进行分析。这样的分析可以是用于鉴定来自特定细菌的DNA的目的(以确定所述患者是否已被所述细菌感染)或可以是用于所述患者的DNA是否具有一种或多种造成医学病况的点突变的目的。

US-A-8 598 338公开了使用固体载体从生物材料(例如，细胞)分离DNA的组合物和方法。所述方法包括至少下述步骤：

(a)用缓冲的裂解组合物裂解所述生物材料，所述裂解组合物包含：(i)锂盐，例如，氯化锂，浓度为至少1M，但是优选高得多的浓度(多至10M)，(ii)表面活性剂，其可以是浓度为0.05至0.2％的SDS，但是优选地是以高得多的浓度(例如，至少5％)存在的非离子表面活性剂，和(iii)任选的螯合剂；

(b)将来自(a)的组合物与“DNA掺加溶液”混合，所述DNA掺加溶液可以是(i)无水醇(例如，甲醇、乙醇或最优选地是异丙醇)，或(ii)浓度为10-15M的锂盐溶液；

(c)使得到的混合物与固体载体接触，从而固定来自裂解的材料的DNA；

(d)用包含醇的洗涤液洗涤所述载体，并且

(e)洗脱所述DNA。

尽管US-A-8 598 338的总公开内容没有排除，但是高度优选的是，其工序不使用离液剂(例如，胍盐)实施。实施例4和5中所述的工序按照上述教导进行，并且使用6M LiCl裂解溶液和10M LiCl“DNA掺加溶液”。

US-A-8 598 338的工序具有下述缺点：在所述裂解组合物和“DNA掺加溶液”中所用的高锂盐浓度具有锂盐污染所分离的DNA的风险。在这一点上，已知30Mm的LiCl抑制PCR反应，参见作者为Ganaie等人的以“Inhibition of Polymerase Chain Reaction byLithium Chloride(借助氯化锂的聚合酶链式反应的抑制)”为题的文献(InternationalJournal of Life SciencePharma Research，Vol.2/Issue 4，2012年10-12月，第L1-L5页)。因此，LiCl污染可能影响下游应用。

因此，本发明的一个目的是避免或减轻上述缺点。

根据本发明的第一方面，提供从生物材料分离包含DNA的核酸的方法，所述方法包括下述步骤：

(i)用水溶液实施所述生物材料的裂解，以产生水性的裂解的组合物，所述水溶液包含浓度为0.05-1.0M的锂、螯合剂和表面活性剂，