[发明专利]用于选择具有脂肪酶活性的酶的方法

权利要求书

1.一种选择具有脂肪酶活性的多肽的方法，该方法包括：

(i)将复数个合成化合物悬浮在水相中，其中这些合成化合物各自包括：

(a)编码多肽的多核苷酸，以及

(b)与所述多核苷酸连接的脂肪酶底物；并且

其中该水相包括用于表达该多肽的组分；

(ii)与该水相形成油包水乳剂，其中这些合成化合物在该乳剂的水性液滴中被区室化；

(iii)在该乳剂的水性液滴内表达该多肽，其中在水性液滴中具有脂肪酶活性的多肽水解在该液滴中的一个或多个合成化合物；并且

(iv)分离这些合成化合物以回收水解的和/或非水解的合成化合物。

2.如权利要求1所述的方法，其中该脂肪酶底物是甘油三酸酯。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中编码多肽的该多核苷酸在该甘油三酸酯的2位处连接。

4.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中这些合成化合物进一步包括选择性标记。

5.如权利要求4所述的方法，其中该选择性标记与该脂肪酶底物连接(例如，在该甘油三酸酯的1或3位处连接)。

6.如权利要求4或5所述的方法，其中在水性液滴中具有脂肪酶活性的表达的多肽在该液滴中从一个或多个合成化合物切割下该选择性标记，从而允许选择性去除步骤(iv)的这些非水解的合成化合物。

7.如权利要求4所述的方法，其中该选择性标记与编码多肽的该多核苷酸连接。

8.如权利要求4或7所述的方法，其中该选择性标记被该非水解的合成化合物螯合，从而允许选择性去除步骤(iv)的这些水解的合成化合物。

9.如权利要求4-8中任一项所述的方法，其中该选择性标记是亲和标签(例如，生物素)。

10.如权利要求9所述的方法，其中用链霉亲和素(例如，链霉亲和素涂覆的微球)将步骤(iv)的这些水解的合成化合物从这些非水解的合成化合物中分离。

11.一种合成化合物，该合成化合物包括：

(a)编码多肽的多核苷酸；以及

(b)与所述多核苷酸连接的脂肪酶底物。

12.如权利要求11所述的合成化合物，其中该脂肪酶底物是甘油三酸酯。

13.如权利要求12所述的合成化合物，其中编码多肽的该多核苷酸在该甘油三酸酯的2位处连接。

14.如权利要求11-13中任一项所述的合成化合物，其中该多肽具有脂肪酶活性。

15.如权利要求11-14中任一项所述的合成化合物，该合成化合物进一步包括选择性标记。

16.如权利要求15所述的合成化合物，其中该选择性标记与该脂肪酶底物连接(例如，在该甘油三酸酯的1或3位处连接)。

17.如权利要求15所述的合成化合物，其中该选择性标记与编码多肽的该多核苷酸连接。

18.如权利要求11-17中任一项所述的合成化合物，其中该选择性标记是亲和标签(例如，生物素)。

19.一种制备如权利要求11-18中任一项所述的合成化合物的方法，该方法包括：

(i)将脂肪酶底物与编码多肽的多核苷酸连接；并且

(ii)回收该合成化合物。

20.一种多核苷酸文库，该多核苷酸文库包括根据权利要求11-18中任一项所述的复数个不同的合成化合物。

21.一种包括如权利要求20所述的多核苷酸文库的油包水乳剂，其中这些合成化合物在该乳剂的水性液滴中被区室化。

22.一种制备如权利要求21所述的乳剂的方法，该方法包括：

(i)将该复数个合成化合物悬浮在该水相中；并且

(ii)将(i)的悬浮液与油混合。