[发明专利]用于筛选气味剂和芳香受体的细胞系

权利要求书

1.一种细胞，在该细胞内包含激活的内源性RTP1基因，其中该细胞还表达RTP1蛋白。

2.如权利要求1所述的细胞，其中该细胞是非嗅觉细胞。

3.如权利要求2所述的细胞，其中该细胞来源于HEK293T细胞系。

4.如权利要求1～3中任一项所述的细胞，还包含编码气味剂受体的核酸。

5.如权利要求4所述的细胞，其中该气味剂受体是从由吲哚、粪臭素和麝香气味剂受体构成的群组中选出的。

6.如权利要求1～5中任一项所述的细胞，其在内源性RTP1基因座的上游包含启动子，并且其中该RTP1基因在该细胞中表达。

7.如权利要求6所述的细胞，其中该启动子是CMV启动子。

8.如权利要求1～7中任一项所述的细胞，其包含Cas蛋白。

9.如权利要求1～5中任一项所述的细胞，其包含与转录激活结构域融合的dCas蛋白。

10.一种在真核细胞中激活内源性RTP1基因的方法，包括：

a.引入与RTP1基因上游的基因组靶位点互补的向导RNA；和

b.引入Cas核酸酶蛋白以与该向导RNA形成复合物，以形成向导RNA-Cas蛋白复合物。

11.如权利要求10所述的方法，还包括将包含启动子的供体DNA引入到内源性RTP1基因座上游的基因组靶位点中，其中该启动子驱动该RTP1基因的表达。

12.如权利要求10所述的方法，其中该复合物还包含与转录激活结构域融合的dCas9蛋白，其中该激活结构域驱动该RTP1基因的表达。

13.如权利要求11所述的方法，其中该Cas蛋白是Cas9蛋白。

14.如权利要求13所述的方法，其中该Cas9蛋白是从由Cas9和Cas9切口酶构成的群组中选出的。

15.如权利要求14所述的方法，其中该Cas蛋白是Cas9。

16.如权利要求14所述的方法，其中该Cas蛋白是Cas9切口酶。

17.如权利要求11所述的方法，还包括用该向导RNA-Cas蛋白复合物切割与该向导RNA序列相邻的靶核酸序列。

18.如权利要求10～17中任一项所述的方法，还包括将编码气味剂受体的核酸引入到该细胞中。

19.一种鉴定化合物或化合物混合物的方法，该化合物或化合物混合物激活、模拟、阻断、抑制、调节和/或增强嗅觉受体在非气味细胞中的活性，其中该细胞包含激活的内源性RTP1基因，其中该方法还包括：

a.使该受体或其嵌合体或片段与激活、模拟、阻断、抑制、调节和/或增强该受体的化合物或化合物混合物接触；和

b.确定该化合物是否对该受体的活性有影响。

20.如权利要求19所述的方法，其中该嗅觉受体来自从由麝香和恶臭受体构成的群组。

21.如权利要求19所述的方法，其中该恶臭受体选自粪臭素或吲哚受体。

22.如权利要求19所述的方法，其中该麝香受体选自多环麝香和硝基麝香受体。

23.通过权利要求19～22中任一项的方法获得的化合物或化合物混合物，该化合物或化合物混合物激活、模拟、阻断、抑制、调节和/或增强嗅觉受体在非气味剂细胞中的活性。