[发明专利]用于改进巴豆醇生产的工程化微生物和方法

权利要求书

1.一种使用工程化微生物生产生物产品的方法，其中巴豆醇是生物产品，或者巴豆醇是生物产品途径中的中间体，所述方法包括：

在导致巴豆醇产生的条件下，或使用巴豆醇作为导致生物产品产生的生物产品途径的中间体的条件下，培养所述工程化微生物，其中，所述工程化微生物包括至少一种基因修饰，该基因修饰引起(a)将巴豆醇转化为巴豆醛的醇脱氢酶(ADH)，(b)将丁醛转化为丁醇的ADH，或(c)将巴豆醛转化为丁醛的烯烃还原酶，或(a)、(b)和(c)的任何组合，的活性的部分或完全丧失。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述微生物还包含至少一种编码生物产品途径的酶的外源核酸，其中所述生物产品途径是巴豆醇途径，或者使用巴豆醇作为生物产品途径的中间体。

3.一种工程化微生物，包括至少一种基因修饰和至少一种编码生物产品途经的酶的外源核酸，所述基因修饰引起(a)将巴豆醇转化为巴豆醛的醇脱氢酶(ADH)，(b)将丁醛转化为丁醇的ADH，(C)将巴豆醛转化为丁醛的烯烃还原酶，或(a)、(b)和(c)的任何组合，的活性的部分或完全丧失，其中，所述生物产品途径为巴豆醇途径或使用巴豆醇作为生物产品途径的中间体。

4.根据前述任一项权利要求所述的工程化微生物，其特征在于，所述醇脱氢酶将巴豆醇转化为巴豆醛，将丁醛转化为丁醇，或二者皆有。

5.根据前述任一项权利要求所述的方法或工程化微生物，其特征在于，所述工程化微生物在至少2、3、或4个基因中具有基因修饰。

6.根据前述任一项权利要求所述的方法或工程化微生物，其特征在于，所述工程化微生物在至少2、3、或4个基因中具有基因缺失。

7.根据前述任一项权利要求所述的方法或工程化微生物，其特征在于，所述ADH活性由选自adhE、adhP、yqhD和yahK或其任何组合的基因编码。

8.根据前述任一项权利要求所述的方法或工程化微生物，其特征在于，所述工程化微生物在选自adhE、adhP、yqhD和yahK的单个基因中，或选自(adhE,adhP)、(adhE,adhP),或(adhE,yqhD)、(adhE.yahK)、(adhE,adhP,yqhD)、(adhE,adhP,yahK)和(adhE,adhP,yqhD,yahK)的多个基因中具有基因缺失。

9.根据前述任一项权利要求所述的方法或工程化微生物，其特征在于，所述丧失是指活性完全丧失。

10.根据前述任一项权利要求所述的方法或工程化微生物，其特征在于，ADH的部分或完全丧失减少巴豆醇向巴豆醛或丁醛向丁醇或二者的积累或转化。

11.根据前述任一项权利要求所述的方法或工程化微生物或微生物，其特征在于，所述烯烃还原酶活性选自EC No.1.3.1.-类。

12.根据前述任一项权利要求所述的方法或工程化微生物，其特征在于，所述烯烃还原酶的部分或完全丧失减少丁醛和/或丁醇的积累或转化。

13.根据前述任一项权利要求所述的方法或工程化微生物，其特征在于，所述烯烃还原酶的活性由nemA基因或ygjM或二者编码。

14.根据前述任一项权利要求所述的方法或工程化微生物，其特征在于，所述工程化微生物在nemA基因或oxyqjM基因或二者中具有基因缺失。

15.根据前述任一项权利要求所述的方法或工程化微生物，其特征在于，所述工程化微生物在大肠杆菌中具有nemA缺失。

16.根据前述任一项权利要求所述的方法或工程化微生物，其特征在于，所述工程化微生物在枯草芽孢杆菌中具有ygjM缺失。

17.根据前述任一项权利要求所述的方法或工程化微生物，其特征在于，所述工程化微生物在nemA和选自adhE、adhP、yqhD和yahK的单一基因，或选自(adhE、adhP)、(adhE、adhP)或(adhE、yqhD)、(adhE、yahK)、(adhE、adhP、yqhD)、(adhE、adhP、yahK)和(adhE、adhP、yqhD、yahK)的多个基因中具有基因缺失。