[发明专利]基于PLA2R1表位谱和扩散分析的膜性肾病的预后和监测

说明书

本发明涉及一种基于分析PLA2R1表位谱来评估受试者的特发性膜性肾病预后的方法。本发明进一步涉及一种基于分析PLA2R1表位扩散来监测特发性膜性肾病进展的方法。本发明强调三个PLA2R1结构域(CysR、CTLD1和CTLD7)参与抗PLA2R1活性，其中两个(CTLD1和CTLD7)与活动性特发性膜性肾病更紧密相关，可能通过表位扩散机制相连。

技术领域

本发明涉及一种基于PLA2R1表位谱分析来评估受试者的膜性肾病预后的方法。本发明进一步涉及一种基于PLA2R1表位扩散分析来监测膜性肾病进展的方法。

背景技术

特发性膜性肾病(iMN)是一种自身免疫疾病，且是成人肾病综合征的常见病因。疾病演变随自发缓解、持续性蛋白尿或末期肾病而高度可变。2009年，Beck等人发现M型磷脂酶A2受体(PLA2R1)是iMN中主要的足细胞抗原。在随后的研究中，已经在53％-80％的iMN患者中广泛证实抗PLA2R1自身抗体的存在。这些自身抗体的致病作用尚未被证实，但在大多数研究人群中，抗PLA2R1抗体滴度似乎与疾病活性相关。

然而，来自抗PLA2R1滴度的个体结果预测尚不清楚。实际上，虽然自身抗体在大多数患者的对症治疗或免疫抑制治疗下的缓解期间消失，但是在肾素-血管紧张素系统(RAS)阻断下，其在明显的临床缓解期间可能持续存在。此外，大多数情况下高抗PLA2R1抗体滴度似乎与随后的肾脏不良结果相关，但一些发作时自身抗体滴度高的患者表现出抗PLA2R1活性的急剧下降和疾病缓解。

iMN的治疗是有争议的。KDIGO指南(肾脏疾病改善全球结果)建议在所有iMN患者中使用肾素血管紧张素系统的阻断剂和利尿剂进行支持性对症治疗，仅在肾功能恶化或持续性肾病综合征的情况下使用免疫抑制治疗。

因此，免疫抑制治疗往往只在发生重大且可能不可逆的并发症之后才开始。另一方面，在用对症治疗可能出现缓解的患者中，不必要的早开始免疫抑制是徒劳的。因此，需要更好地预测患有特发性膜性肾病的患者的结果。

因此，长期以来需要开发特发性膜性肾病预后的综合性、敏感性和特异性的方法。此外，对于使对其治疗作出反应的患者分层以便对无效的治疗方案提供必要的修改的方法还存在未满足的需求。

发明简述

M型磷脂酶A2受体(PLA2R1)是具有大的胞外区的180kDa膜受体，所述胞外区包含7-17kDa的10个不同球状结构域，即一个富含半胱氨酸的结构域(CysR)、一个纤连蛋白II型结构域(FNII)和八个不同的C型凝集素结构域(CTLD1-8)。各个结构域由约10个氨基酸的小接头序列分开。

本发明人首次筛选了一组50名iMN患者对9个PLA2R1突变体的反应性，所述突变体依次缺失该受体的10个胞外结构域中的每一个。本发明人鉴定了三个不同结构域中的表位：

-PLA2R1的富含半胱氨酸的结构域(CysR)；

-PLA2R1的C型凝集素结构域1(CTLD1)；和

-PLA2R1的C型凝集素结构域7(CTLD7)。

然后，通过蛋白质印迹法和ELISA，他们使用这些结构域的众多可溶形式证实了每个结构域的独立反应性。然后，发明人建立了表位特异性ELISA，并将一组69名患者分为三个表位特异性亚组，并分析其表位谱和疾病活性之间的关系。因此，发明人已经表明，在血清采样中抗CysR的抗PLA2R1反应性与有利结果相关，而抗CTLD1和CTLD7的反应性与活动性疾病和肾脏预后差相关。

此外，他们表明，随访期间表位谱可能会改变。抗CTLD1和抗CTLD7抗体随疾病缓解而消失，且随疾病复发再度出现，而抗CysR限制性活性与稳定且轻微的疾病活性相关。