[发明专利]流感A/SHANGHAI/2/2013H7序列的改性H7血凝素糖蛋白

说明书

关于在联邦政府赞助的研究和开发项下发明的权利的声明

本发明是在美国国立卫生研究院授予的基金号为AI082642的美国政府财政支持下完成的。美国政府在本发明中可能有一定的权利。

相关申请的交叉引用

本申请要求于2015年5月4日提交的名称为“MODIFIED H7 HEMAGLUTTININ GLYCOPROTEIN OF THE INFLUENZA A/SHANGHAI/2/2013 H7 SEQUENCE”、申请号62/156,718的美国临时专利申请的优先权。上述申请的全部内容通过引用并入本文。

参考电子提交的序列表

本申请包含已经以ASCII格式电子提交的序列表，并且通过引用将其全部内容并入本文。所述ASCII拷贝，创建于2015年3月25日，被命名为“SEQUENCE LISTING MODIFIED H7_ST25”，大小为10.6KB。

技术领域

本发明是流感A/SHANGHAI/2/2013 H7序列的H7血凝素糖蛋白的序列修饰。

针对两种不同的新发A型流感病毒(IAV)，2009大流行H1N1(A(H1N1)pdm09)和H7N9禽流感(H7N9)，开发的疫苗的不一致的免疫原性提供了评估T细胞在有效体液免疫应答发展中的角色的机会。例如，虽然A(H1N1)pdm09是高度可传播的并由于缺乏预先存在的抗体而在出现后的12个月内传播至200多个国家，但由于A(H1N1)pdm09流感引起的发病率和死亡率低于预期，可能是由于暴露于季节性A(H1N1)毒株或接种季节性A(H1N1)疫苗的个体中预先存在的T细胞应答。2013年H7N9在中国的出现与更高的致死率相关。由于担心其致死率和大流行性，H7N9疫苗被优先考虑用于生产，并开发了疫苗。

流感疫苗可以唤醒记忆T细胞在不存在佐剂的情况下产生保护性免疫并刺激抗体应答；因此，通常只需要接种一次疫苗就能对季节性流感病毒株产生保护性免疫。在中国已被证明，与其他亚基和季节性流感疫苗相比，传统的重组H7血凝素疫苗生产用以解决禽源H7N9流感的再出现(假定交叉反应性体液免疫被推定为不存在)具有较差的功效。与A(H1N1)pdm09形成鲜明对比的是，未佐剂化的H7N9疫苗抗原性差，并且用未佐剂化的H7N9血凝素(HA)接种导致在I期临床试验中血细胞凝集抑制(HI)血清转化率仅为6％和15.6％(相比之下，类似的未佐剂化的A(H1N1)pdm09亚基疫苗为89％)。这些疫苗的临床试验要求使用佐剂将这些疫苗的抗原性提高到可接受的标准，然而在美国，标准的季节性流感疫苗不使用佐剂。即使用两剂H7N9疫苗与佐剂一起给新型病毒产生新的记忆T辅助细胞，在最近的II期临床试验中，只有59％的受试者血清转化。与对其他IAV感染的典型免疫应答相比，在H7N9感染的人类中H7N9的中和抗体的发展也延迟，并且对H7N9HA的IgG亲合力显著较低。在其他H7亚型的临床试验中，减毒H7N1疫苗引起低HI滴度(titer)，失活的亚单位H7N7疫苗免疫原性差。

H7 HA似乎是独特的非抗原性的。在荷兰2003年发生的H7N7暴发中观察到的相关H7 HA的人类抗体应答也在HI滴度中降低。综上所述，这些研究表明，对H7N9感染的适应性免疫应答可能会减弱和延迟，即使在自然感染的情况下。

CD4+T细胞向B细胞提供帮助，支持同种型转换和亲和力成熟(affinity maturation)；因此，减少和延迟的对H7 HA的抗体应答表明T细胞的帮助被限制或废除。H7N9序列中的CD4⁺ T辅助表位比其他IAV中少。

已经在适应于人类宿主的慢性(“命中和保持”(hit-and-stay))病毒中观察到类似的表位缺失(epitope deletion)模式，例如Epstein Barr病毒(EBV)和单纯疱疹病毒(HSV)，但未在急性(“命中和跑”(hit-and-run))病毒中发现。表位缺失介导的免疫逃逸是人类免疫缺陷病毒(HIV)和丙型肝炎病毒(HCV)病毒发病机制的公认机制，但是这种逃逸机制以前尚未在流感描述过。

H7N9可能使宿主应答最小化的另一种手段是采用“免疫伪装”，这是我们团队确定的一种免疫逃逸的新机制。可以使用JanusMatrix(EpiVax，Providence，RI，USA)来鉴定来源于具有与人类序列的高T细胞受体(TCR)“交叉保守性”的病原体的T细胞表位，该算法比较面向TCR的模式的CD4⁺ T细胞表位存在于人类基因组中。