[发明专利]使用混合相固相萃取材料的肽纯化

权利要求书

1.纯化肽和/或多肽的方法，所述方法包括以下步骤或由以下步骤组成：

(a)在酸性或中性水性条件下将包含肽和/或多肽的样品装载到混合相固相萃取(SPE)材料上，其中所述材料由反相/离子交换材料组成或包含反相/离子交换材料；

(b)用以下洗涤所述混合相SPE材料：

(ba)包含至少50％(v/v)有机溶剂的酸性或中性组合物；和/或

(bb)酸性或中性水溶液；

和

(c)用包含至少50％(v/v)有机溶剂的碱性组合物从所述混合相SPE材料洗脱所述肽和/或多肽。

2.纯化与混合相SPE材料结合的肽和/或多肽的方法，所述方法包括以下步骤或由以下步骤组成：

(a)用以下洗涤：

(aa)包含至少50％(v/v)有机溶剂的酸性或中性组合物；和/或

(ab)酸性或中性水溶液；

和

(b)用包含至少50％(v/v)有机溶剂的碱性组合物从所述混合相SPE材料洗脱所述肽和/或多肽。

3.如权利要求1或2所述的方法，其中所述混合相SPE材料是磺化聚二乙烯基苯(DVB)或磺化聚苯乙烯二乙烯基苯(SDB)。

4.如权利要求1或3所述的方法，其中所述装载条件具有大于或等于1且小于7的pH，优选3-4的pH。

5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述酸性有机溶剂具有大于或等于1且小于7的pH，优选3-4的pH。

6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中所述酸性水溶液具有大于或等于1且小于7的pH，优选3-4的pH。

7.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述碱性有机溶剂具有大于7且小于或等于14的pH，优选8-10的pH。

8.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中用于洗涤的有机溶剂和用于洗脱的有机溶剂独立地选自：

(a)醇，优选非支链、支链或环状的C₁至C₆伯烷醇或仲烷醇，例如甲醇、乙醇、2-丙醇或丁醇；

(b)烷烃，优选非支链、支链或环状的C₅至C₁₀烷烃，例如己烷、环己烷、戊烷或异戊烷；

(c)卤代烃，优选氯代烃，例如氯代未取代或取代的C₁至C₆非支链、支链或环状烷烃，包括氯仿和二氯甲烷；或者氟代烃，例如氟代未取代或取代的C₁至C₆非支链、支链或环状烷烃，包括三氟乙醇，取代基优选为一个或两个羟基；

(d)醚，优选具有3至10个碳原子和1至3个醚氧原子的链状或环状醚，例如乙醚、四氢呋喃、乙基甲基醚或1,4-二噁烷；

(e)酮，优选具有2至10个碳原子的链状或环状酮，例如丙酮；

(f)腈，优选非支链、支链或环状的C₁至C₆伯腈或仲腈，例如乙腈；

(g)亚砜，优选二烷基亚砜，烷基为非支链、支链或环状C₁至C₆烷基，如DMSO；和

(h)酯，优选非支链、支链或环状C₁至C₆烷酸与非支链、支链或环状C₁至C₆烷醇的酯；例如乙酸乙酯。

9.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中用包含至少50％(v/v)有机溶剂的酸性或中性组合物进行的所述洗涤是用包含至少50％(v/v)醇的酸性或中性组合物进行的洗涤；和/或洗脱是用包含至少50％(v/v)乙腈的碱性组合物进行的。

10.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中所述纯化包括以下或由以下组成：减少一种或多种以下物质的量或除去一种或多种以下物质：盐；洗涤剂；脂质；糖类，特别是单糖和二糖；用于样品处理的容器的聚合物或低聚物壁材料；和增塑剂。

11.如前述权利要求中任一项所述的方法，其中装载、洗涤和洗脱中的一步、多步或所有步骤在柱中实施。