[发明专利]用于改善多糖‑蛋白质缀合物及其获得的多价疫苗配制剂的吸附的方法

说明书

发明背景

肺炎链球菌是儿童的细菌性肺炎、脑膜炎和败血症的主要原因。由肺炎链球菌(S pneumoniae)引起的儿童死亡的最近估值范围为全球每年70-100万。在2000年，估计发生约145万例严重肺炎球菌疾病(不确定性范围111–180万)事件。肺炎球菌疾病在年龄为1–59个月的儿童中引起约82.6万例死亡(0.58–0.926M)，其中9.1万(6.3–10万)为HIV阳性儿童，并且73.5万(51–82万)为HIV阴性儿童。

已经许多多年的多价肺炎球菌多糖疫苗已经证明在成年人，特别是老年人和高风险者中预防肺炎球菌疾病是有价值的。然而，婴儿和幼童较差响应未缀合的肺炎球菌多糖。2000年2月在美国第一次许可了肺炎球菌缀合物疫苗其含有7种最经常分离的血清型(4、6B、9V、14、18C、19F和23F)，所述血清型在当时在幼童和婴儿中引起侵入性肺炎球菌疾病。

此外，Prevnar^TM 13(Wyeth)是一种得到批准的疫苗，其在1、3、4、5、7F、9V、14、18C和23F外含有来自血清型6A、6B、19A、19F的多糖缀合物。Synflorix^TM(GSK)是另一种得到批准的疫苗，其提供了针对1、4、5、6B、7F、9V、14、18C、19F、和23F的保护以及针对19A &6A的交叉保护。

疫苗配制剂一般必须是稳定且一致稠度的，以适应长货架期的需要和多剂量容器的使用。基于蛋白质(包括多糖-蛋白质缀合物)的疫苗经受蛋白质聚集和沉淀，这可以由于沉淀的蛋白质产物的不可用性而导致疫苗的较低的有效总浓度。特别地，多糖-蛋白质缀合物疫苗似乎具有比单独的载体蛋白更强大的聚集趋势(参见Berti et al,2004,Biophys J 86:3-9)。多糖-蛋白质缀合物疫苗的配制剂的选择可以大大影响蛋白质聚集。参见Ho et al.,2001,Vaccine 19:716-725。

尽管全球范围开发了几种现有的多价肺炎球菌多糖-蛋白质缀合物疫苗组合物，本领域中不断需要疫苗配制剂，其提供了个别缀合物的高吸收并且免于具有多糖-蛋白质缀合物的免疫原性组合物的聚集/沉淀。

此类多价肺炎球菌疫苗中传统使用的佐剂是铝盐，如氢氧化铝和磷酸铝。许多其它实验佐剂是已知的，然而对铝盐的吸附仍然是最常见的疫苗佐剂配制剂。虽然其用途广泛，但是铝盐不可能总是与特定的抗原相容，从而就明矾上多糖-蛋白质缀合物的百分比吸附或抗原性而言导致相当大的变化。

铝佐剂上吸附的缀合物疫苗候选物的免疫学特性和稳定性取决于各种参数，如i)每种抗原的抗原性，ii)用于缀合的载体蛋白类型，和iii)使用的佐剂类型。最重要地，先前已经报告了佐剂上抗原吸附的程度是表明配制过程的批次间一致性和其对疫苗产品的效力的可能影响的关键参数之一。此外，多糖-蛋白质缀合物的百分比吸附可以在贮存配制剂后或在不利的情况，如温度偏移下进一步下降。参见WHO Expert Committee on Biological Standardization,Recommendations for the production&control of Pneumococcal conjugate vaccines的第54次会议,2003年11月17-21日；Carl E.Frasch,Session IV:Conjugate Vaccines；Vaccine Technology II；Portugal.2008。

按照欧洲管理局(European regulatory agency，EMEA)肺炎球菌多糖-蛋白质缀合物指南，应当认为吸收的完整性(％未结合的缀合物)与明矾含量、无菌度、同一性和游离多糖含量一起是重要的质量控制参数。参见Assessment Report for Synflorix 2009,Procedure No.EMEA/H/C/000973。WHO推荐最大化明矾沉淀的抗原(例如白喉和破伤风类毒素)的吸附，其中这些疫苗中的至少80％抗原是吸附的。

在制造多糖-蛋白质缀合物期间，配制剂可以包含多糖-多糖类型、蛋白质-蛋白质类型或多糖-蛋白质类型的聚集体。在成品中也观察到此类聚集，导致多糖-蛋白质缀合物疫苗的填充小瓶的4％-10％拒绝率，从而影响缀合物疫苗的稳定性和效力。

鉴于上文就多糖及其缀合物的聚集和稳定性而言讨论的局限性，对在下游加工到肺炎球菌缀合物疫苗制造的最终配制剂贮存间降低聚集和稳定化所述多糖仍然有独特的需要。

发明概述