[发明专利]利用纳米粒子的核酸检测用试剂盒及核酸检测方法

权利要求书

1.一种非诊断目的的利用纳米粒子的密度差异的核酸检测方法，所述密度差异取决于核酸是否被纳米粒子捕获或核酸是否与纳米粒子结合，其特征在于，包括：

步骤a，利用与目标核酸特异性结合的引物集扩增目标核酸；其中正向引物被选自由生物素、抗原、靶分子和寡聚核苷酸组成的组中的任一种标记；逆向引物通过N-羟基丁二酰亚胺修饰法进行荧光标记；

步骤b，通过向上述步骤a中扩增的核酸添加纳米粒子，来使核酸捕获于纳米粒子或与纳米粒子相结合；其中所述纳米粒子涂覆有选自由抗生物素蛋白、链霉亲和素、能够通过抗原-抗体反应结合到引物结合抗原的抗体、适体以及与标记到正向引物的寡聚核苷酸互补的寡聚核苷酸组成的组中的任一种；

步骤c，将在上述步骤b中核酸捕获于纳米粒子或核酸与纳米粒子相结合而成的复合物放入凝胶卡容器，反应5分钟，其中所述凝胶卡由产生密度差异的成分和凝胶成分依次层叠组成；所述产生密度差异的成分为玻璃珠，所述凝胶成分为琼脂糖；

步骤d，对在上述步骤c中制备的混合物进行离心分离2至6分钟；以及

步骤e，与对照组比较凝胶卡容器内沉淀物的位置，其中阳性检测体在低于阴性检测体的位置形成带。

2.根据权利要求1所述的核酸检测方法，其特征在于，在上述步骤a中利用聚合酶链式反应或等温扩增反应扩增核酸。

3.根据权利要求2所述的核酸测定方法，其特征在于，上述等温扩增反应利用选自由依赖解旋酶的扩增、重组酶聚合酶扩增、滚环扩增、环介导等温扩增、依赖核酸序列的扩增、转录介导的扩增、核糖核酸的信号介导扩增、链置换扩增、等温多重置换扩增、单引物等温扩增及依赖解旋酶的环形扩增组成的组中的一种方法进行。

4.根据权利要求1所述的核酸测定方法，其特征在于，上述纳米粒子为选自由磁性粒子、金纳米粒子、银纳米粒子、铂金纳米粒子、量子点、上转换纳米粒子、石墨烯-纳米粒子复合物、染色纳米粒子及胶乳纳米粒子组成的组中的一种。

5.根据权利要求1所述的核酸检测方法，其特征在于，在上述步骤c中，还对嵌入剂的增强子进行处理。

6.根据权利要求5所述的核酸检测方法，其特征在于，所述嵌入剂为选自由SYBR绿色、溴化乙锭、biotium gelred、biotium gel Green、JOJO类、POPO类、SYTO类、BOBO类、TOTO类、放线菌素、亚德里亚霉素、蒽、苯并芘、碘化丙啶-缠绕剂、偏端霉素、纺锤菌素、吖啶、补骨脂素、黄连素、普鲁黄素、道诺霉素、阿霉素、沙利霉素、花青染料及LDS751组成的组。

7.根据权利要求1所述的核酸检测方法，其特征在于，在上述步骤d之前不包括额外的分离过程或清洗过程。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的核酸检测方法，其特征在于，在上述步骤a中，通过对利用互不相同的荧光标记的两种以上的引物集进行处理，来多重确认是否存在核酸。

9.根据权利要求1所述的核酸检测方法，其特征在于，引物的荧光标记选自由Cy3、Cy5、羧基四甲基若丹明、TEX、TYE、HEX、FAM、TET、JOE、MAX、ROX、VIC、Cy3.5、德克萨斯红、Cy5.5、BHQ、Iowa Black RQ及IRDye组成的组。