[发明专利]新型ENDOS突变型酶

说明书

本发明提供了EndoS突变型酶，以及其编码基因。所述EndoS突变型酶的特征在于其在EndoS D233Q的氨基酸序列中具有特定且额外的突变，且当与EndoS D233Q的活性比较时，表现出作为结合IgG中位置297的Asn的N‑连接的糖链(N297‑连接的糖链)的活性的降低的水解活性。

技术领域

本发明涉及内-β-N-乙酰葡糖苷酶S(EndoS)的新型突变体，编码所述突变体的基因，重组质粒，用所述质粒转化的转化体，和使用所述突变体修饰抗体的糖链的方法。

背景技术

糖蛋白广泛存在于动物和植物的组织、真核微生物的细胞膜和壁等中。近来，已变得清楚的是，糖蛋白的糖链在诸如细胞分化、癌化和细胞-细胞识别的机制中发挥重要作用，并且正在研究糖链的结构和功能之间的相关性以阐明这些机制。在培养细胞系中，糖蛋白被翻译为由一致氨基酸序列组成的蛋白，然后通过翻译后修饰糖基化以递送至培养基中。由于这种翻译后修饰不是仅根据其氨基酸序列确定，即使在相同培养系统中表达的相同蛋白上，添加的糖链在其结构上也有所不同。

抗体是具有连接至重链分子的Fc区的位置297的Asn侧链的N-连接的糖链(N297-连接的糖链)的糖蛋白分子。抗体是基础研究和医学领域中的重要分子，并且特别作为抗体药物被急切地研究和开发。因此，糖链的各种作用正变得清楚(非专利文献1：J. N.Arnold, 等人, Annu. Rev. Immunol, 2007, 25, 21050)。目前，使用的治疗性抗体主要是IgG类分子。这样的抗体通常由培养的动物细胞（诸如由CHO细胞和NS0细胞）产生，并且由这些动物细胞产生的抗体的N297-连接的糖链是由核心岩藻糖、末端唾液酸基和半乳糖基和二等分GlcNAc异质的双触角复合型糖链(非专利文献2：R. Jefferis, Biotechnol.Prog., 2005, 21-11-6)。已经揭示抗体的N297-连接的糖链对包括ADCC(抗体依赖性细胞介导的细胞毒性)和CDC的效应活性具有很大影响(非专利文献3：Nimmerjahn, Nat. Rev.Immunol. 2008, 8, 34-47；非专利文献4：Jefferis Nat. Rev. Drug Discovery, 2009,8, 226-234)并且还报道了它们也具有对血液中的半衰期影响的可能性(非专利文献5：D.Bumbaca, AAPSJ, 2012, 14, 3)。而且，已经揭示，在N297-连接的糖链的非还原末端2,6-唾液酸化的抗体是IVIG中的活性药物成分(非专利文献6：Wang, ACS Chem. Biol. 2012,7, 110-122)。而且，认为包括IgG和Fc片段的治疗性分子中的N297-连接的糖链的异质性作为活性成分对其性质和质量具有很大影响，并且存在不可否认的可能性，即少量异质糖基化分子的污染显著改变了最终产品的性质。