[发明专利]赖氨酸脱羧酶的突变型开发方法及其应用

权利要求书

1.一种赖氨酸脱羧酶的变异体，其特征在于，由下述氨基酸序列中的一种序列表示：

序列4的氨基酸序列，在序列15的氨基酸序列中，作为第7位的氨基酸的亮氨酸被蛋氨酸取代，作为第8位的氨基酸的天冬酰胺被甘氨酸取代；

序列5的氨基酸序列，在序列15的氨基酸序列中，作为第7位的氨基酸的亮氨酸被蛋氨酸取代，作为第8位的氨基酸的天冬酰胺被甘氨酸取代，作为第14位的氨基酸的苯丙氨酸被酪氨酸取代；

序列6的氨基酸序列，在序列15的氨基酸序列中，第14位的苯丙氨酸被半胱氨酸取代，作为第44位的氨基酸的赖氨酸被半胱氨酸取代；

序列7的氨基酸序列，在序列15的氨基酸序列中，作为第7位的氨基酸的亮氨酸被蛋氨酸取代，作为第8位的氨基酸的天冬酰胺被甘氨酸取代，第14位的苯丙氨酸被半胱氨酸取代，作为第44位的氨基酸的赖氨酸被半胱氨酸取代。

2.一种DNA，其特征在于，对权利要求1所述的赖氨酸脱羧酶的变异体进行编码。

3.根据权利要求2所述的DNA，其特征在于，上述DNA由序列11至序列14的序列中的一种序列表示。

4.一种重组DNA载体，其特征在于，包含根据权利要求2或3所述的DNA。

5.一种宿主细胞，其特征在于，由权利要求4所述的重组DNA载体转化而成，其中所述宿主细胞不是植物或动物品种。

6.一种宿主细胞的提取物，其特征在于，上述宿主细胞由权利要求4所述的重组DNA载体转化而成，其中所述提取物包含权利要求1所述的赖氨酸脱羧酶的变异体。

7.一种尸胺的生产方法，其特征在于，将选自由权利要求4所述的重组DNA载体转化而成的宿主细胞及上述宿主细胞的提取物组成的组中的一种用作生物催化剂。

8.根据权利要求7所述的尸胺的生产方法，其特征在于，利用葡萄糖生产尸胺。

9.根据权利要求7所述的尸胺的生产方法，其特征在于，使用1M至6M的浓度的赖氨酸作为基质。

10.一种权利要求1所述的赖氨酸脱羧酶的变异体的制备方法，其特征在于，以组合的方式取代残基，以便在序列15的十聚体的界面中形成二硫键。

11.一种权利要求1所述的赖氨酸脱羧酶的变异体的制备方法，其特征在于，以单独或组合的方式取代位于序列15的十聚体的界面8Å内的残基。