[发明专利]NT细胞的贮存方法和存储系统

说明书

提供了使用体细胞核转移(NT)技术制备的细胞的贮存方法和存储系统，所述细胞具有人白细胞抗原(HLA)‑A、HLA‑B、HLA‑DR等的基因的纯合基因型。NT细胞衍生的干细胞的存储可以适用于自体或同种异体患者，并且可以提供可移植的细胞和组织材料用于各种疾病，如糖尿病、骨关节炎、帕金森氏病等的治疗。

发明领域

本公开涉及贮存使用体细胞核转移(NT)技术制备的细胞的方法和细胞的存储系统，所述细胞具有人白细胞抗原(HLA)-A、HLA-B、HLA-DR等的基因的纯合基因型。

发明背景

细胞疗法是医学中用细胞，且特别是干细胞实现“根本性治疗”疾病的新范例的新兴领域，所述疾病被认为通过药物或外科手术的方式治疗受限。特别地，这是用于抗击疾病，通过再生或替换实现组织和器官的功能性恢复的新技术领域，所述组织和器官由于衰老、疾病、事故等而受损或功能性退化，并且在再生医学领域中作为难治性疾病的备选治疗出现。

然而，为了更广泛使用细胞疗法，必须解决复杂的免疫排斥问题。免疫排斥的原因是称为主要组织相容性抗原复合物(MHC)的6种HLA(HLA-A、HLA-B、HLA-C、HLA-DP、HLA-DQ、HLA-DR)细胞表面蛋白。人总共表达6对HLA基因，包括来自父本基因的6种和来自母体基因的6种。正常体细胞仅总共表达3对属于MHC I类的HLA-A、HLA-B和HLA-C，并且免疫细胞总共表达6对，包括MHC I类和MHC II类。HLA表面抗原的作用是在细胞表面上展示细胞中存在的蛋白质片段，使得免疫细胞能够在体内检测感染或突变。由于该原因，HLA表面抗原也称为抗原呈递蛋白。

体细胞核转移(SCNT)技术指通过取出体细胞的核并将其移植到去核的卵母细胞中来复制体细胞的技术，或者换言之，使用体细胞产生干细胞系的技术，所述干细胞系保留体细胞的遗传特性，该技术通过分离体细胞的核并将体细胞的分离的核注射到除去了核的卵母细胞中进行。此方法的优点在于，由于使用患者自身的体细胞，免疫排斥应答受到抑制，从而实现患者特异性治疗。尽管NT技术的发展，从重建的卵母细胞形成胚泡的比率仍然较低。因此，已经进行了各种尝试来提高胚泡形成率。特别地，NT胚胎中最大的障碍是合子基因激活(ZGA)，其在包括人在内的大型哺乳动物中出现于4-8细胞阶段中。为了提高成功率而不考虑供体的变化性，有必要消除现有的表观遗传障碍。特别地，为了从2、4和8细胞阶段成功产生胚泡，有必要通过在产生期间在没有任何缺陷或损失的情况下改变供体核的表观遗传状态来显著增加胚泡形成成功率。

因此，如上所述，需要产生细胞的方法和细胞的存储系统，用于再生医学治疗和难治性疾病治疗的细胞疗法，所述细胞消除免疫排斥应答，并且实现患者特异性治疗。

发明详述

技术问题

本发明的发明人通过从纯合细胞形成不诱导免疫排斥应答的细胞治疗剂或可移植细胞完成了本发明。

提供了贮存适用于各种疾病的治疗的自体或同种异体NT细胞衍生的干细胞的方法。

提供了产生NT细胞衍生的干细胞的方法和NT细胞衍生的干细胞的存储系统。

技术方案

根据本发明的一方面，提供了贮存免疫相容性核转移(NT)细胞衍生的干细胞的方法，所述方法包括：

a)在多个供体组织中筛选纯合性；

b)从纯合细胞中分离核以产生NT细胞；

c)从所述NT细胞产生干细胞；并且

d)冷冻保存所述干细胞。

根据本发明的另一方面，提供了产生免疫相容性核转移(NT)细胞衍生的干细胞的方法，所述方法包括：

a)在多个供体组织中筛选纯合性；

b)从纯合细胞分离核以产生NT细胞；并且