[发明专利]评估血细胞的细胞表面受体的方法

说明书

本发明涉及：用于在液体全血样品或由其来源的样品中快速评估目的血细胞(blood cell of interest，BCoI)的一个或更多个亚类(例如CD4+细胞和CD8+细胞)的新方法；确定该细胞的细胞计数的方法；确定CD4/CD8比的方法；确定样品中该受体的量的方法；以及用于进行该评估的垂直流测定装置。

背景技术

全血是用于来自标准献血或血液采样的人血的术语。在采集过程中，血液通常与抗凝剂结合，但一般是未另外加工的。全血包含血浆、红细胞(红血球)和白细胞(白血球)以及血小板。肝素、柠檬酸盐和EDTA(乙二胺四乙酸)是添加以阻止实验室分析用血液样品中的凝血的常用抗凝剂。

CD4+T辅助细胞是白细胞，是人免疫系统的关键部分。它们经常被称为CD4细胞、T辅助细胞或T4细胞，并且是淋巴细胞的亚群。它们被称为辅助细胞，原因是它们的主要作用之一是发送信号给其他类型的免疫细胞，包括CD8杀伤细胞。CD4细胞发送信号，CD8细胞破坏感染性颗粒。如果例如在未经治疗的HIV感染中，或者在移植之前的免疫抑制之后CD4细胞耗尽，则身体容易受到本来可以战胜的多种感染的伤害。

血细胞通常包含细胞表面受体(膜受体，通常作为跨膜受体的形式)。这些分子是参与细胞和外部世界之间交流的专门化整合膜蛋白(integral membrane protein)。细胞外信号分子(通常是激素、神经递质、细胞因子、生长因子或细胞识别分子)附着于受体，引起细胞功能的变化。这个过程被称为信号转导：该结合引发在膜的细胞内侧的化学变化。通过这种方式，受体在细胞通讯和信号转导中起着独特而重要的作用。许多跨膜受体由两个或更多个蛋白质亚基组成，这些蛋白质亚基集体地起作用，并且当配体结合、脱落或在其“激活”循环的另一阶段时可解离。(维基百科引文2014年7月24日)。

称为CD4(分化簇4，cluster of differentiation 4)的受体是在免疫细胞如T辅助细胞、单核细胞、巨噬细胞和树突细胞表面上发现的糖蛋白。CD4受体发现于20世纪70年代后期，并且在1984年被命名为CD4之前最初被称为leu-3和T4(在与其反应的OKT4单克隆抗体之后)。在人中，CD4蛋白由CD4基因编码。(Isobe M，Huebner K，Maddon PJ，Littman DR，Axel R，Croce CM(June 1986).″The gene encoding the T-cell surface protein T4is located on human chromosome 12″.Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.83(12)：4399-4402，和Ansari-Lari MA，Muzny DM，Lu J，Lu F，Lilley CE，Spanos S，MalleyT，Gibbs RA(April 1996).″A gene-rich cluster be吐温the CD4and triosephosphate isomerase genes at human chromosome 12p13″.Genome Res.6(4)：314-26.)

HIV感染导致表达CD4的T细胞数目逐渐减少。医疗专业人员参考“CD4计数”来决定何时开始HIV感染期间的治疗或如何调节疾病期间的药物治疗。正常血液值通常表示为每微升(μL)(或立方毫米，mm³)血液的细胞数目，CD4细胞的正常值为500至1200个细胞/mm³。CD4计数测量表达CD4的T细胞的数目。虽然CD4计数不是直接的HIV测试——例如其不检查病毒DNA或抗HIV特异性抗体的存在——其被用来评估患者的免疫系统。在欧洲，当CD4计数达到350个细胞/μL的水平时，患者经常接受治疗，但在美国通常约为500个细胞/μL；低于200个细胞/μL的人群患AIDS所限定的疾病的风险很高。最新的国立卫生研究院指南建议治疗任何HIV阳性个体，不论CD4计数。医疗专业人士也参考CD4测试来确定治疗的功效。

不只T辅助细胞携带表面和胞质CD4受体。在J Immunol Methods.1990Dec 31；135(1-2)：59-69，Filion等中，报道了所有的单核细胞都是CD4阳性的。全血单核细胞数目一般较高。确定与T辅助细胞相关的CD4受体数目的方法因此需要涵盖分选出也携带CD4受体的单核细胞的步骤或方法部分。

所含有的携带CD4的其他血细胞(如巨噬细胞)的比例很低，并且在该情况下是血液中可忽略的组分。