[发明专利]用于生成数字荧光图像的方法有效
申请号: | 201680044740.2 | 申请日: | 2016-07-27 |
公开(公告)号: | CN107850543B | 公开(公告)日: | 2021-01-15 |
发明(设计)人: | 托马斯·卡尔克布伦纳;拉尔夫·沃勒申斯基 | 申请(专利权)人: | 卡尔蔡司显微镜有限责任公司 |
主分类号: | G01N21/64 | 分类号: | G01N21/64;G02B21/00;G02B21/16;G02B21/36;G02B27/58 |
代理公司: | 中原信达知识产权代理有限责任公司 11219 | 代理人: | 杨靖;车文 |
地址: | 德国*** | 国省代码: | 暂无信息 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 用于 生成 数字 荧光 图像 方法 | ||
1.用于生成数字荧光图像的方法,其中,将配设有荧光物质的样本布置在激光扫描显微镜的物平面中,并且在时间上依次以逐个像素的方式在像素停留时间(T)期间用激发光加载所述样本,由此针对每个像素产生发射光,通过探测器探测所述发射光并且将所述发射光转换成分别配属于测量时间点的振幅(I)的序列,由这些分别配属于测量时间点的振幅形成总振幅,并且将所有像素的总振幅组合成荧光图像,其特征在于,
针对每个像素将在较晚的测量时间点(tm)开始的振幅(I)的序列与在相对于所述较晚的测量时间点(tm)具有时间偏差(τ)的较早的测量时间点(tn)开始的振幅(I)的同样序列进行至少一次自相关,分别形成针对时间偏差(τ)特定的至少一个相关振幅(Kτ)并且由所形成的所述至少一个相关振幅(Kτ)求出总振幅。
2.按照权利要求1所述的方法,其特征在于,利用公式Kτ=((I(tn)-I平均)×(I(tm)-I平均))平均计算出相关振幅(Kτ),其中,I(tn)是较早的测量时间点(tn)的振幅(I),I(tm)是较晚的测量时间点(tm)的振幅(I),m=n+τ,并且I平均是振幅(I)的平均值。
3.按照权利要求2所述的方法,其特征在于,将相关振幅(Kτ)通过与振幅(I)的平均值的平方相除来进行标准化。
4.按照权利要求1或2所述的方法,其特征在于,计算出针对不同的时间偏差(τ)的相关振幅(Kτ)并且确定具有相对最大的相关振幅(Kτ)的那个时间偏差(τ),并且将其用作总振幅。
5.按照权利要求4所述的方法,其特征在于,将具有相对最大的总振幅的时间偏差(τ)配属于荧光染料并且储存在数据库中。
6.按照权利要求1或2所述的方法,其特征在于,计算出针对不同的时间偏差(τ)的相关振幅(Kτ)并且确定这些相关振幅(Kτ)的平均值,并且将该平均值用作总振幅。
7.按照权利要求1或2所述的方法,其特征在于,计算出针对不同的时间偏差(τ)的相关振幅(Kτ)并且确定这些相关振幅(Kτ)的和,并且将该和用作总振幅。
8.按照权利要求1或2所述的方法,其特征在于,测量时间点的数量大于400,并且时间偏差(τ)位于50与150之间。
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