[发明专利]二磷酸甲羟戊酸脱羧酶变异体、和利用了该变异体的烯烃化合物的制造方法有效
| 申请号： | 201680045135.7 | 申请日： | 2016-08-03 |
| 公开（公告）号： | CN107922937B | 公开（公告）日： | 2022-03-15 |
| 发明（设计）人： | 折下凉子;白井智量;高桥和弘;日座操;田边祐介 | 申请（专利权）人： | 国立研究开发法人理化学研究所;日本瑞翁株式会社;横滨橡胶株式会社 |
| 主分类号： | C12N15/09 | 分类号： | C12N15/09;C12N1/15;C12N1/19;C12N1/21;C12N5/10;C12N9/88;C12P5/02 |
| 代理公司： | 北京市中咨律师事务所 11247 | 代理人： | 曾祯;段承恩 |
| 地址： | 日本*** | 国省代码： | 暂无信息 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 二磷酸 甲羟戊酸 脱羧酶 异体 利用 烯烃 化合物 制造 方法 | ||
1.烯烃化合物的制造方法，包括：在二磷酸甲羟戊酸脱羧酶存在下，使下述式(1)所示的化合物与ATP反应的工序，
所述二磷酸甲羟戊酸脱羧酶是序列号2所记载的氨基酸序列的209位的苏氨酸替换成精氨酸，并且74位的精氨酸替换成组氨酸或甲硫氨酸的蛋白质，
所述烯烃化合物是异戊二烯或异丁烯，
式(1)中，当所述烯烃化合物是异戊二烯的情况下，R1和R2分别为甲基和乙烯基，或分别为乙烯基和甲基；当所述烯烃化合物是异丁烯的情况下，R1和R2均为甲基。
2.烯烃化合物的制造方法，包括：将导入了以下DNA或包含该DNA的载体的宿主细胞进行培养，采集该宿主细胞和/或其培养物中生成的烯烃化合物的工序，所述DNA编码二磷酸甲羟戊酸脱羧酶，
所述二磷酸甲羟戊酸脱羧酶是序列号2所记载的氨基酸序列的209位的苏氨酸替换成精氨酸，并且74位的精氨酸替换成组氨酸或甲硫氨酸的蛋白质，
所述烯烃化合物是异戊二烯或异丁烯。
3.生成烯烃化合物的催化活性提高了的二磷酸甲羟戊酸脱羧酶的制造方法，该制造方法包括：在为由序列号2所记载的氨基酸序列组成的蛋白质的二磷酸甲羟戊酸脱羧酶中，
使序列号2所记载的氨基酸序列的209位的苏氨酸替换成精氨酸，
使序列号2所记载的氨基酸序列的74位的精氨酸替换成组氨酸或甲硫氨酸的工序，所述烯烃化合物是异戊二烯或异丁烯。
4.二磷酸甲羟戊酸脱羧酶，其中，
序列号2所记载的氨基酸序列的209位的苏氨酸替换成精氨酸，并且74位的精氨酸替换成组氨酸或甲硫氨酸。
5.DNA，编码权利要求4所述的二磷酸甲羟戊酸脱羧酶。
6.载体，包含权利要求5所述的DNA。
7.宿主细胞，其中，导入了权利要求5所述的DNA或权利要求6所述的载体。
8.二磷酸甲羟戊酸脱羧酶变异体的制造方法，包括：培养权利要求7所述的宿主细胞，采集该宿主细胞中表达的蛋白质的工序。
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