[发明专利]药物应用中蛋白质修饰的方法

说明书

本发明涉及修饰用于药物应用的蛋白的方法和用于治疗诸如病原体感染和癌症等疾病的试剂。本发明还涉及通过连接多个蛋白单元与位点特异性偶联以增加蛋白质分子量从而延长其体内半衰期。本发明还公开了以蛋白质或适体形式构建亲和配体的方法，其达到治疗靶标时会活化，因此，为治疗提供更高的特异性。

相关申请的交叉引用

本申请要求在2015年6月12日提交的美国临时专利申请62/174,528的优先权。该在先申请的全部公开内容被认为是本申请的公开内容的一部分，并通过引用结合与此。

背景技术

技术领域

本发明涉及修饰用于药物应用的蛋白的方法和用于治疗诸如病原体感染和癌症等疾病的试剂。本发明还涉及延长蛋白质和适配体基试剂在体内半衰期和效价的方法。

背景信息

蛋白质药物已经改变了现代医学的面貌，在如癌症，贫血和嗜中性白血球减少症等多种不同的疾病中得到应用。然而，与任何药物一样，对其靶目标具有改进的特异性和选择性的药物的需求和愿望是非常有意义的，特别是在开发具有与其结合的已知靶目标的第二代蛋白质药物。也期望在体内半衰期长的蛋白质药物以降低其注射频率而为患者提供更好的治疗。延长治疗剂(不论是治疗性蛋白质，肽还是小分子)的半衰期通常需要对治疗剂本身进行专门配制或修改。诸如聚乙二醇(PEG)化传统的修饰方法(向治疗剂中加入抗体片段或白蛋白分子)具有许多严重的缺陷。例如，已观察到聚乙二醇化蛋白质在动物模型中引起肾小管空泡化。肾脏清除的聚乙二醇化蛋白质或其代谢物可能在肾脏积聚，导致PEG水合物的形成，干扰正常的肾小球滤过。因此，仍有相当大的需要以合理的成本生产具有延长的半衰期性质的高纯度形式的治疗剂的替代组合物和方法。

附图说明

图1示出了具有适合长度柔性连接子的多价同型Fab(抗原结合片段)形式以获得更高的亲和力。

图2示出了靶向细胞/微生物上的不同蛋白质的两个抗原的异质Fab形式，以获得更高的亲和力。

图3示出了靶向相同靶蛋白的两个表位位点的异质Fab形式以获得更高的亲和力。

图4示出了选择性还原法构建双特异性抗体和ADC。

图5示出了通过连接两个或多个全长抗体的双特异性抗体。

图6示出了通过连接两个全长抗体来制备双特异性抗体的示例。

图7示出了使用靶向抗体上的碳水化合物的固定化的亲和基团以选择性地保护抗体上的一个FC偶联位点以实现单偶联的示例。

图8示出了药物和连接子在抗体上的单标记。

图9示出了自组装前抗体的结构和活化机制。

图10示出了具有Fc修饰物的自组装前抗体的示例。

图11示出了具有Fc修饰物的自组装前抗体的活化机制。

图12示出了具有Fc修饰物的自组装前抗体的示例。

图13示出了具有异种MM的自组装前抗体的示例。

图14示出了前适配体的结构和活化机制。

图15示出了自组装前适配体的结构和活化机制。

图16示出了具有半衰期修饰物或药物偶联物的前适配体的示例。

图17示出了结合基潜酶的示例，其是一种一与适配体结合就活化的酶。

图18示出了结合基潜酶的示例，其是一种一与抗体结合就活化的酶。

图19示出了一个基于抗体结合配体-连接子-酶抑制配体的潜酶的方案。