[发明专利]诱导的扩展的多潜能干细胞、制备及使用方法

权利要求书

1.一种用于扩展分离的多潜能细胞的细胞潜能的细胞培养基组合物，所述组合物包含来自下组中每个的多潜能性的化学扩展剂(CEP)：

(1)细胞因子，

(2)糖原合酶激酶(GSK)抑制剂，

(3)G蛋白偶联受体(GPCR)抑制剂，和

(4)聚(ADP-核糖)聚合酶-1(PARP1)抑制剂，

所述多潜能性的化学扩展剂的量有效诱导未经处理的细胞重编程为扩展的多潜能细胞，

其中所述细胞因子是人白血病抑制因子(LIF，“L”)；所述GSK抑制剂是[6-[[2-[[4-(2,4-二氯苯基)-5-(5-甲基-1H-咪唑-2-基)-2-嘧啶基]氨基]乙基]氨基]-3-吡啶甲腈](“C”)；所述GPCR抑制剂是DiM((S)-(+)-马来酸二甲茚定)(“D”)；并且所述PARP1抑制剂是MiH(盐酸米诺环素)(“M”)，

其中L的浓度范围为1-100ng/ml；C的浓度范围为0.5-5μM；D的浓度范围为1-5μM，并且M的浓度范围为0.5-5μM。

2.根据权利要求1所述的组合物，其还包含Rho相关的含有卷曲螺旋的蛋白激酶(ROCK)抑制剂，其中所述ROCK抑制剂是Y27632[(+)-(R)-反式-4-(1-氨基乙基)-N-(4-吡啶基)环己烷甲酰胺+++二盐酸盐)]，以0.2至20μM的浓度范围存在。

3.根据权利要求1-2中任一项所述的组合物，其包含细胞培养基并且进一步地包含内-IWR1(4-[(3aR,4S,7R,7aS)-1,3,3a,4,7,7a-六氢-1,3-二氧代-4,7-桥亚甲基-2H-异吲哚-2-基]-N-8-喹啉基-苯甲酰胺)或XAV939(3,5,7,8-四氢-2-[4-(三氟甲基)苯基]-4H-噻喃并[4,3-d]嘧啶-4-酮。

4.试剂盒，其包含根据权利要求1-3中任一项所述的组合物，其中小分子量化合物以相对量存在以将其放入用于分化的细胞的细胞培养基中以诱导扩展的多潜能性。

5.一种诱导供体细胞中扩展的多潜能性的方法，所述供体细胞选自多潜能的部分或完全分化的细胞，所述方法包括：

用根据权利要求1-3中任一项所述的组合物培养所述供体细胞达有效诱导扩展的多潜能性的一段时间，

其中所述供体细胞选自由以下组成的组：小鼠胚胎干细胞，人胚胎干细胞，和诱导的多潜能干细胞。

6.根据权利要求5所述的方法，其中将所述供体细胞在包含所述CEP的重编程培养基中培养9-20天的时间。

7.根据权利要求6所述的方法，其中所述供体细胞作为单细胞或作为小集落接种。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述供体细胞作为单细胞接种，所述方法进一步包括在包含LCDM的培养基中培养之前，将所述细胞在包含根据权利要求2所述的ROCK抑制剂的细胞培养基中培养12至48小时的时间段。