[发明专利]经改进的维生素生产

权利要求书

1.一种利用宿主细胞生产核黄素的方法，其中所述宿主细胞是Bacillus subtilis，其携带特定的经修饰的rib前导序列triple ribO和 del mro175rib，以及内源Rho的失活，其中核黄素的产量与携带活性、未修饰的内源Rho基因的相应菌株相比增加了约30%。

2.权利要求1所述的方法，其中在rho基因中引入了部分缺失，所述部分缺失位于核糖体结合位点、冷休克结构域、RNA结合位点、ATP结合位点或启动子区，其中所述核糖体结合位点是对应于SEQ ID NO:1的第-17至-6位（ATG-17bp至ATG-6bp）的核苷酸，所述冷休克结构域是对应于SEQ ID NO:1的第+160至+360位（ATG + 160bp至ATG + 360bp）的核苷酸，所述RNA结合位点是对应于SEQ ID NO:1的第+174至+336位（ATG + 174bp至ATG + 336bp）的核苷酸，所述ATP结合位点是对应于SEQ ID NO:1的第+538 至+1062位（ATG +538bp至ATG +1062bp）的核苷酸，和所述启动子区是对应于SEQ ID NO:1的第-200至+1位（ATG-200bp至ATG + 1）的核苷酸。

3.权利要求2所述的方法，其中所述部分缺失是对应于所述核糖体结合位点、冷休克结构域、RNA结合位点、ATP结合位点或启动子区的核苷酸的缺失。

4.根据权利要求2所述的方法，其中在对应于SEQ ID NO:1的第+155至+165位（ATG +155bp至ATG + 165bp）的片段中引入了一个或更多个突变，其中所述片段被缺失。

5.根据权利要求1、2或4中任一项所述的方法，其包含将对应于SEQ ID NO:2的第56位的野生型氨基酸替换为天冬氨酸。

6.根据权利要求5所述的方法，其包含将对应于SEQ ID NO:2的第56位的位置上的甘氨酸替换为天冬氨酸。

7.权利要求1所述的方法，其中通过敲除rho基因使得与未修饰Rho的活性相比Rho的活性消除。

8.根据权利要求1-7中任一项所述的方法，其中所述Bacillus subtilis菌株选自BS4912、BS7301、BS7307或BS7309。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的方法，其包括以下步骤：

（a）在适合核黄素生产的发酵条件下培养所述宿主细胞，并任选地

（b）从培养基中分离核黄素。