[发明专利]使用经掩蔽的半抗原在福尔马林固定石蜡包埋的组织中的蛋白质邻近测定

权利要求书

1.一种经掩蔽的半抗原-抗体缀合物，其具有式(IV)的结构：

其中抗体为一级抗体，所述一级抗体对选自以下的靶标具有特异性：PD-L1/CD80；CTLA-4/CD80；CTLA-4/CD86；PD-L2/PD-1；ErbB家族的任意组合；DNA混合匹配修复蛋白的任意组合；翻译后修饰-磷酸化蛋白；和翻译后修饰-泛素化蛋白，

Z为键或基团，所述基团包含支化或非支化、经取代或未经取代、饱和或不饱和的具有1-30个碳原子的脂族基团，并且任选具有一个或多个选自O、N或S的杂原子，

半抗原为选自吡唑类、硝基苯基化合物类、苯并呋咱类、苯并呋喃类、三萜类、脲类、硫脲类、鱼藤酮和鱼藤酮衍生物、噁唑类、噻唑类、香豆素和香豆素衍生物、硝基芳基类、环木脂素类、生物素、地高辛、荧光素、2-羟基喹喔啉和二硝基苯基的半抗原；

A为键或基团，所述基团包含支化或非支化、经取代或未经取代、饱和或不饱和的具有1-15个碳原子的脂族基团，并且任选具有一个或多个选自O、N或S的杂原子；

q为0或1；

n为1-25范围内的整数；且

所述掩蔽基团具有式(II)的结构：

其中

R¹独立选自H、F、Cl、Br、I、-O-甲基、-O-乙基、-O-正丙基、-O-异丙基、-O-正丁基、-O-仲丁基或-O-异丁基；具有1-4个碳原子的-S-烷基；具有1-4个碳原子的-O-烷基；具有1-4个碳原子的-N(H)-烷基；具有1-6个碳原子的-N-(烷基)₂；具有1-4个碳原子且任选取代有N或S的烷基；氰基；和羧基；且

R²为酶底物，其中所述酶底物选自磷酸酯基、酯基、酰胺基、硫酸酯基、糖苷基、脲基和硝基。

2.权利要求1的经掩蔽的半抗原-抗体缀合物，其中所述掩蔽基团具有式(IIB)的结构：

或式(IIC)的结构：

或式(IID)的结构：

且

其中R²选自磷酸酯基、酯基、酰胺基、硫酸酯基、糖苷基、脲基和硝基。

3.权利要求2的经掩蔽的半抗原-抗体缀合物，其中每个R¹基团不同。

4.权利要求1-3任一项的经掩蔽的半抗原-抗体缀合物，其中ErbB家族的成员是Her1、Her2、Her3和/或Her4。

5.权利要求1-3任一项的经掩蔽的半抗原-抗体缀合物，其中DNA混合匹配修复蛋白是MLH1、MLH3、MSH2、MSH3、MSH6、PMS1和/或PMS2。

6.权利要求1-3任一项的经掩蔽的半抗原-抗体缀合物，其中翻译后修饰-磷酸化蛋白包含磷酸化酪氨酸、磷酸化丝氨酸、磷酸化苏氨酸、或磷酸化组氨酸。

7.一种用于分析样品以确定第一靶标是否与第二靶标邻近的方法，所述方法包括：

(a)使样品与权利要求1-6任一项的对第一靶标具有特异性的经掩蔽的半抗原-抗体缀合物接触，以形成第一靶标-经掩蔽的半抗原-抗体缀合物复合物；

(b)使样品与对第二靶标具有特异性的暴露酶-抗体缀合物接触，以形成第二靶标-暴露酶-抗体缀合物复合物，其中选择暴露酶-抗体缀合物的暴露酶，从而使得其能够与经掩蔽的半抗原-抗体缀合物的酶底物部分反应，以形成第一靶标-暴露半抗原-抗体缀合物复合物；

(c)使样品与第一检测试剂接触，以标记第一靶标-暴露半抗原-抗体缀合物复合物或第一靶标；和

(d)检测经标记的第一靶标-暴露半抗原-抗体缀合物复合物或经标记的第一靶标。

8.权利要求7的方法，其中经掩蔽的半抗原-抗体缀合物的经掩蔽的半抗原衍生自选自以下的半抗原：7-(二乙基氨基)香豆素-3-羧酸、生物素、硝基吡唑、噻唑磺酰胺、苯并呋咱和2-羟基喹喔啉。