[发明专利]使用经掩蔽的半抗原在福尔马林固定石蜡包埋的组织中的蛋白质邻近测定

说明书

本申请公开了经掩蔽的半抗原和经掩蔽的半抗原‑抗体缀合物，其可用于能够检测样本中处于彼此邻近位置的靶标。

相关申请的交叉引用

本申请要求2016年2月29日提交的美国临时专利申请第62/301,489号的申请日的权益，以及2015年8月28日提交的美国临时专利申请第62/211,590号的申请日的权益，其公开内容在此通过引用整体并入本申请。

技术领域

所公开的实施方案涉及检测样本中的靶标(target)，包括位于样本近侧的靶标。所公开的实施方案还提供了使用经掩蔽的半抗原(caged hapten)或经掩蔽的半抗原缀合物检测福尔马林固定石蜡包埋的组织中的蛋白质二聚体的邻近测定法(proximityassay)。

工业实用性

本申请在化学和诊断领域具有工业实用性。

背景技术

免疫组织化学(IHC)是指使用对特定抗原具有特异性的抗体对生物样品中的抗原诸如蛋白质进行检测、定位和/或定量的方法。IHC提供了确切地识别特定蛋白质位于组织样品内何处的实质性优点。这也是检查组织本身的有效方式。原位杂交(ISH)是指检测、定位和定量核酸的方法。IHC和ISH两者均可在各种生物样品诸如组织(例如新鲜冷冻的、福尔马林固定的、石蜡包埋的组织)和细胞学样品上进行。靶标的识别可使用各种标记(例如，生色、荧光、发光，放射性测量标记)来检测，而不管靶标是核酸还是抗原。为了在临床环境中强有力地检测、定位和定量靶标，识别事件的扩增是期望的，因为确信检测低丰度细胞标志物的能力对于诊断目的变得越来越重要。例如，响应于单个抗原检测事件，在标志物位点沉积数百或数千个标记分子，通过扩增，增强了所述检测识别事件的能力。

蛋白质-蛋白质相互作用网络是生物系统的标志。蛋白质-蛋白质相互作用形成信号通路，其调节正常细胞和癌细胞的细胞功能的各个方面。已经开发了用于检测蛋白质-蛋白质相互作用的方法，诸如细胞外生长因子激活之后的瞬时受体酪氨酸激酶二聚化和复合物形成；然而，这些方法不是特别设计用于福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)的组织。

对于已知在癌症生物学中是重要决定因素的生物标志物而言，询问特定分子间相互作用的存在和分布的能力在新的诊断能力的背景下是高度感兴趣的并且用于确定药物开发背景下的治疗效果。在冷冻和石蜡包埋的组织上探测和记录分子相互作用分布的能力仍然无法获得；已经提出了解决这个问题的替代技术，尽管在实际使用中解决方案没有被证明是有效和可靠的。

OLink AB最近开发了邻近连接测定法。这是在福尔马林固定石蜡包埋的组织上原位检测蛋白质-蛋白质相互作用的唯一已知商业产品。邻近连接测定技术使用DNA连接酶来产生挂锁环形DNA模板，以及用于滚环扩增的Phi29 DNA聚合酶。这些酶是昂贵的。而且，这些酶不适用于自动化系统和方法。由于这些原因，邻近连接测定法通常不被认为可用于商业应用。

发明内容

申请人开发了一种检测位于样品近侧的靶标的优良方法。在本申请的一个方面，提供了一种用于分析样品以确定第一靶标是否与第二靶标邻近的方法，所述方法包括：(a)形成第二靶标-暴露酶-抗体缀合物复合物；(b)形成第一靶标-经掩蔽的半抗原-抗体缀合物复合物；(c)使第一靶标-经掩蔽的半抗原-抗体缀合物复合物的经掩蔽的半抗原暴露，以形成第一靶标-暴露半抗原-抗体缀合物复合物；(d)使样品与第一检测试剂接触，以标记第一靶标-暴露的半抗原-抗体偶联物复合物或第一靶标；和(e)检测经标记的第一靶标-暴露的半抗原-抗体偶联物复合物或经标记的第一靶标。