[发明专利]蛋白质保持扩展显微法

权利要求书

1.一种用于感兴趣的样品的蛋白质的保持和成像的方法，其包括以下步骤：

(a)使用双官能交联剂处理所述样品，其中所述双官能交联剂包含蛋白质反应性化学基团和可溶胀材料反应性化学基团；

(b)使用包含可溶胀材料的前体的组合物渗透所述样品；

(c)启动所述前体的聚合以形成可溶胀材料，其中所述双官能交联剂结合至所述样品内的蛋白质并且结合至所述可溶胀材料，从而所述蛋白质锚定到所述可溶胀材料；

(d)使所述样品经受消化；

(e)使所述可溶胀材料溶胀以形成扩展样品；以及

(f)对所述扩展样品成像。

2.根据权利要求1所述的方法，其中所述双官能交联剂是6-((丙烯酰基)氨基)己酸的琥珀酰亚胺酯(AcX)。

3.根据权利要求1所述的方法，其中所述消化是所述样品的物理、化学或酶破坏。

4.根据权利要求1或3所述的方法，还包含所述样品的抗体染色的步骤。

5.根据权利要求4所述的方法，其中在使用所述双官能交联剂处理之前，所述样品用一种或多种抗体染色。

6.根据权利要求4所述的方法，其中在所述样品处于扩展状态后，所述样品用一种或多种抗体染色，并且所述消化保存蛋白质抗原性。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品表达一种或多种荧光蛋白。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述一种或多种荧光蛋白锚定到所述可溶胀材料。

9.根据权利要求1所述的方法，其中所述样品通过加入水以溶胀所述可溶胀材料来各向同性地扩展。

10.根据权利要求3所述的方法，其中所述消化步骤包括使用LysC、高压灭菌或蛋白酶K来处理所述样品。

11.根据权利要求3所述的方法，其中所述消化是酶消化。

12.根据权利要求1所述的方法，其中至少一种蛋白质锚定到所述可溶胀材料。