[发明专利]用于调整细胞仪测量的系统和方法

说明书

用于操作流式细胞仪的方法和系统可包括用于未染色样本的事件的前向散射值、侧向散射值和荧光强度值，以及将荧光强度值与前向散射‑侧向散射图区相关联。用于操作流式细胞仪的方法和系统还可包括：对染色样本的事件的前向散射值、侧向散射值和荧光强度值进行测量；确定染色样本的事件的前向散射‑侧向散射图位置；以及针对染色样本的每个事件，将与包含染色样本事件的前向散射‑侧向散射图位置的前向散射‑侧向散射图区相关联的荧光强度值，从该前向散射‑侧向散射图位置处的染色样本事件的测量出的荧光强度值减去。

技术领域

本公开总体上涉及流式细胞仪领域，并且更具体地涉及用于减少样本分析中的误差的方法。

背景技术

如流式细胞仪和扫描细胞仪的粒子分析仪为如下的分析工具，即，该分析工具以光学参数(如光散射和荧光)为基础来实现粒子的表征。在流式细胞仪中，例如，使流体悬浮液中的粒子(诸如分子、分析物结合珠或单个细胞)通过检测区并且对粒子的光散射和荧光性质进行测量，其中，在检测区中粒子暴露于激励光，而激励光通常来自一个或多个激光器。例如细胞的细胞表面蛋白组分的标记可通过试剂来识别，其中，细胞的细胞表面蛋白组分的存在可用作区分特性，并且试剂包含荧光染料以促进检测、鉴定和表征。每种试剂可包含与检测分子缀合的标注(label)，该标注通常为荧光分子或“染料”，并且检测分子将选择性附着至特定标记，例如单克隆抗体。多种不同的粒子或组分可通过使用光谱不同的荧光染料对标记进行标注来区分开。在一些实现方式中，分析仪中包括有多个光电检测器。当使粒子通过激光束时，前向散射(FSC，forward scatter)和侧向散射(SSC，side scatter)检测器上将发生时间相关脉冲，并且荧光发射检测器上也可能发生时间相关脉冲。这就是“事件”，并且对于每个事件，每个检测器、FSC、SSC和荧光发射检测器的检测器输出的量级被存储。所获得的数据包括针对光散射参数和荧光发射中的每个测量的信号。

细胞仪还可包括用于存储检测器输出以及用于分析数据的部件。例如，数据存储和分析可使用与检测电子设备连接的计算机来执行。例如，数据可逻辑性地以表格形式存储，其中每行对应于针对一个粒子(或一个事件)的数据，而列对应于所测量的参数中的每个参数。使用用于存储来自流式细胞仪的数据的标准文件格式(如“FCS”文件格式)以方便使用单独的程序和/或机器来分析数据。使用当前的分析方法，通常将数据显示在二维(2D)图中以便于可视化，但是也可使用其它方法来使多维数据可视化。

使用流式细胞仪测量的参数通常包括从光谱的一个或多个通道(频带)中的荧光分子发射的光、SSC以及FSC，其中，FSC指示由粒子沿着大致前向方向散射的激励光，SSC指示由粒子在大致侧向方向上散射的激励光，其中从荧光分子发射的光被指示为FL1、FL2等或者由主要在该通道中发射的荧光染料命名。不同的细胞类型可通过散射参数以及用染料标注的抗体对各种细胞蛋白质进行标注而产生的荧光发射来识别。

流式细胞仪和扫描式细胞仪均可从例如BD生物科学(San Jose，CA)购买。流式细胞仪描述于以下文献中，例如Landy等人(编)，临床流式细胞仪，纽约科学院年鉴第677(1993)卷；Bauer等人(编)，临床流式细胞仪：原理和应用，威廉姆斯和威尔金斯(1993)；Ormerod(编)，流式细胞仪：实践方法，牛津大学出版社(1997)；Jaroszeski等人(编)，流式细胞仪协议，分子生物学方法第91号，Humana出版社(1997)；以及Practical Shapiro，流式细胞仪，第4版，威利-利斯(2003)；上述全部通过引用并入本文。荧光成像显微镜描述于例如Pawley(编)，生物共聚焦显微镜手册，第2版，Plenum出版社(1989)，其通过引用并入本文。

发明内容

根据本发明的一个方面，提供了用于流式细胞仪实验的方法。