[发明专利]用于核酸文库标准化的方法和组合物

权利要求书

1.一种从多个核酸分子中除去高丰度种类的方法，所述方法包括：

使包括结合部分的多个第一寡核苷酸与第一多个核酸分子杂交，其中所述第一多个核酸分子包括至少一个高丰度种类；

延伸所述多个第一寡核苷酸以产生包括所述结合部分的所述第一多个核酸分子的多条互补链；

使包括所述第一多个核酸分子的所述多条互补链的多个双链核酸分子变性；

使所述第一多个核酸分子的所述多条互补链部分再退火；并且

通过固定在一个或多个固体支持物上的捕获分子除去所述第一多个核酸分子的所述再退火互补链以产生第二多个核酸分子，其中所述捕获分子与所述结合部分特异性结合，

凭此与所述第一多个核酸分子中的所述至少一个高丰度种类的含量相比，所述第二多个核酸分子中的所述至少一个高丰度种类的含量减少。

2.如权利要求1所述的方法，其中所述结合部分是选自下组的官能团，该组由以下各项组成：生物素、链霉亲和素、肝素、适体、点击化学部分、地高辛、一个或多个伯胺、一个或多个羧基、一个或多个羟基、一个或多个醛、一个或多个酮和其任何组合。

3.如权利要求2所述的方法，其中所述结合部分是生物素。

4.如权利要求3所述的方法，其中所述捕获分子是链霉亲和素。

5.如权利要求1-4中任一项所述的方法，所述方法还包括合成所述第一多个核酸分子的所述多条互补链中的至少一个的第二链以产生所述多个双链核酸分子中的一个或多个，所述多个双链核酸分子包括所述第一多个核酸分子的所述多条互补链。

6.如权利要求5所述的方法，其中所述合成包括使多个第二寡核苷酸与所述第一多个核酸分子的所述多条互补链杂交并延伸所述多个第二寡核苷酸。

7.如权利要求6所述的方法，其中所述多个第一寡核苷酸或所述多个第二寡核苷酸包括通用引物结合位点。

8.如权利要求1-7中任一项所述的方法，所述方法还包括扩增所述多个双链核酸分子。

9.如权利要求1-8中任一项所述的方法，其中所述第一多个核酸分子包括多个高丰度种类。

10.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述至少一个高丰度种类代表所述第一多个核酸分子的至少50％。

11.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述至少一个高丰度种类代表所述第一多个核酸分子的至少60％。

12.如权利要求1-9中任一项所述的方法，其中所述至少一个高丰度种类代表所述第一多个核酸分子的至少70％。

13.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述至少一个高丰度种类的含量的减少是至少80％。

14.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述至少一个高丰度种类的含量的减少是至少90％。

15.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述至少一个高丰度种类的含量的减少是至少95％。

16.如权利要求1-12中任一项所述的方法，其中所述至少一个高丰度种类的含量的减少是至少99％。

17.如权利要求9-16中任一项所述的方法，其中所述第二多个核酸分子包括所述多个高丰度种类。

18.如权利要求17所述的方法，其中所述第二多个核酸分子中的所述多个高丰度种类代表所述第二多个核酸分子的少于50％。