[发明专利]用于检测呼吸道合胞病毒抗原P的单克隆抗体

说明书

本发明涉及结合呼吸道合胞病毒(RSV)的蛋白P的单克隆抗体或其片段，其包含具有与SEQ ID No:1或SEQ ID No:5具有至少90％、95％或99％的同一性的序列的重链可变区或具有与SEQ ID No:2或SEQ ID No:6具有至少90％、95％或99％的同一性的序列的轻链可变区。本发明还提供用于离体或体外检测RSV的病毒性抗原P的诊断方法，其中使用由杂交瘤2E6/D2和6H5/H1产生和分泌的单克隆抗体。本发明能够用于检测RSV的试剂盒，其包含有所述杂交瘤产生的抗体。

发明领域

本发明涉及识别人呼吸道合胞病毒(RSV)的蛋白P的单克隆抗体或其片段，其可用于开发人RSV感染的诊断方法。

现有技术

由病毒引起的呼吸系统疾病是世界各地的公共健康问题。儿童人群中这些感染的主要原因是：人呼吸道合胞病毒(RSV)、腺病毒(ADV)、甲型和乙型流感病毒(INF A和B)、副流感病毒(PIV)和人偏肺病毒(MPV)。目前，没有预防这些病毒的有效机制，并且每天产生大约9400 万个新病例(世界卫生组织)。与暴发有关的卫生系统过饱和也会造成重大的经济损失。

RSV是一种病毒，它影响呼吸系统，目前代表着巨大的经济和社会相关性问题，影响到儿童和老年人的高水平的发病率和死亡率。在这些人群中，尤其是在婴儿和两岁以下的儿童中，RSV引起各种各样的临床表现，从更温和的形式如鼻炎、扁桃体炎和中耳炎，以及其他更严重的形式如肺炎、支气管炎、细支气管炎和肺泡炎。血清学研究估计，70％至100％的儿童分别在1岁和2岁时已经至少暴露于该病毒一次。据已估计，每年RSV导致5岁以下的儿童感染约3400万，住院340万，死亡约20万。目前，在智利和拉丁美洲，RSV是一种流行病学相关病毒。一些研究已经表明，RSV在新生儿和婴儿中引起的呼吸系统感染病例的百分比可能高于冬季暴发期间的70％。此外，拉丁美洲的研究强化了RSV 作为2岁以下的个体中下呼吸道感染的主要感染原的作用，其报道发病率超过40％。不幸的是，现在没有批准的疫苗用于免疫新生儿，也没有有效的治疗方法来控制这一人群的感染。

RSV是一种具有单链基因物质和负编码极性的大约15.3kb的包膜 RNA病毒，其属于副粘病毒科(Paramyxoviridae)并属于肺病毒属 (Pneumovirus)。RSV基因组编码以下列方式分类的10个基因： 5′-NS1-NS2-N-P-M-SH-G-F-M2-L-3′，其由RNA依赖性RNA聚合酶(蛋白L)转录为10个独立的信使RNA。这些蛋白中的五种负责基因材料的包装以及定义病毒颗粒的自身结构，分别对应于核衣壳N的蛋白和基质M的蛋白，以及跨膜F、G和SH的糖蛋白。其他四种蛋白M2-1、 M2-2、L和P参与病毒复制和转录。此外，蛋白NS-1和NS-2是非结构蛋白，它们减少感染细胞的I型干扰素的表达，因此它们阻止了固有免疫应答的活化。

在公共卫生服务中，目前的诊断方法包括使用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫层析测试(快速测试)的基于鼻咽拭子样品中直接免疫荧光检测病毒抗原的测试。从所提到的产品来看，基于免疫荧光的病毒检测盒(viral panel)是最引人注目的，因为它们允许检测最大数量的呼吸系统病毒，在利用Luminex xTAG进行呼吸系统病毒检测盒 (RPV)PCR的情况下有12种类型，以及在eSensor呼吸系统病毒检测盒的情况下有14种类型。尽管检测范围广泛，但重要的是要注意它们使用的成本和响应时间因素。在第一个提到的测试的情况下，成本大约70 USD，响应时间为12至18小时，而第二个测试的成本大约90USD，响应时间60分钟。

因此，用有效、快速和低成本的诊断测试来检测RSV是非常重要的，它能够与可用的诊断方法的特征相竞争。针对这样的问题，本发明描述了单克隆抗体，它是用于提供所述需要的必要替代物，因为它们允许特异性识别来自感染RSV的患者的样品中的病毒抗原。这样，本发明包括诸如单克隆抗体的产品和一种替代方法，其使用单克隆抗体用于临床样品中RSV感染患者中具有100％特异性的检测和快速、有效且准确的诊断，并且能够通过ELISA检测浓度等于1.5ng特异性抗原。这将允许临床专业人员确定早期且合适的治疗。