[发明专利]直接接种

说明书

披露的是用于发酵用于生产蛋白质产品的微生物的方法，其中种子罐被省略，结果是该过程远远更短，从而在操作发酵设备方面提供了另外的灵活性。

技术领域

本发明涉及发酵技术。

背景技术

发酵过程是本领域熟知的，并且可以在文献中发现许多不同的发酵方案。

典型地将发酵过程分为以下步骤：(a)在种子扩大培养和主发酵阶段，用于过程细胞的生长和生产的培养基制备；(b)培养基灭菌连同所有的辅助设备以保证无菌环境；(c)接种物或种子生产，其是足够量的纯培养物以接种生产发酵罐；(d)在用于产品形成的主发酵罐中进行的生产阶段；(e)用来分离和纯化发酵产品的下游过程；以及，(f)由该过程产生的流出物的处理和处置。所有这些步骤都是相互关联的，并且发酵过程的成功取决于在过程的发展过程中应该进行的充分优化。

一般假定微生物在发酵的许多阶段都会生长，由停滞期开始，在该时期使微生物适应培养基并且开始生长；对数期，在该时期微生物以恒定生长速率生长，给出在细胞数目和细胞团块方面的指数增长；静止期，在该时期生长已经停止，并且细胞数目保持恒定；以及最后死亡期，在该时期由于细胞死亡，细胞数目减少。

深层发酵过程是常见的发酵系统，并且可以是任何已知的设置，例如分批过程、分批补料过程或连续发酵过程。

分批发酵是这样的一种过程，在该过程中从一开始就在发酵罐中提供生长培养基，其中用预期的微生物接种该发酵罐并且将发酵过程运行直到已经达到预定条件，典型地消耗生长培养基并且由消耗引起微生物生长的停止。

分批补料过程是这样的发酵，其中从发酵过程开始提供一部分的生长培养基，其中添加接种物，并且在发酵另外的底物开始后的某些时间点处，将进料以可以预定的或由发酵罐中的条件确定的速率进料到发酵罐；直到已经达到最大的体积。进料可以具有或可以不具有与初始生长培养基相同的组成。

连续发酵过程是这样的过程，其中将新的生长培养基连续进料到发酵罐中，并且以相同的速率从发酵罐中同时去除发酵物，以使发酵罐中的体积恒定。

在工业发酵过程中，典型地通过以下来进行：首先在发酵罐中提供生长培养基，用包含微生物的接种物接种发酵罐，并且在限定条件(例如pH、温度、氧气水平等)下，按预定时间或直到已经达到预定条件(例如效价，氧水平)的情况下，进行发酵。

接种物通常是在种子发酵罐中制备的用于发酵的微生物的液体培养物，发酵罐典型地具有用于生产的主发酵罐的5％-10％的体积。用于种子发酵罐的生长培养基可以是或可以不是在主发酵罐中使用的相同生长培养基。

在种子发酵罐中，用具有生长培养基体积的5％-10％体积的接种物再次接种种子发酵罐。

因此，典型地从包含生产菌株的小瓶中制备接种物，其中将小瓶首先以小体积接种并使接种物生长至所希望的密度以制备生产菌株的第一培养物，其中在第一生产菌株被接种后，接下来是一系列尺寸递增的发酵罐，其中每一步的体积增加5-20倍，直到已经达到用来接种生产发酵罐的足够体积。这样的一系列尺寸递增的发酵罐又被称为种子训练(seed train)。

接种物通常是在种子发酵罐中制备的用于发酵的微生物的液体培养物，发酵罐典型地具有用于生产的主发酵罐的5％-10％的体积。用于种子发酵罐的生长培养基可以是或可以不是在主发酵罐中使用的相同生长培养基。种子扩大培养的过程涉及从休眠的储用培养物(琼脂板或小瓶)制备微生物群落至可用于接种最终的生产阶段的状态。

发明内容

本发明提供了一种用于发酵产生蛋白质产品的微生物的方法，该方法包括用所述微生物接种发酵罐，其中用微生物直接进行接种，而不使用种子发酵罐。

附图说明

图1显示在如实例1-5中描述的发酵液中获得的总蛋白含量。