[发明专利]OmpG变体

权利要求书

1.一种分离的SEQ ID NO:2的亲本大肠杆菌OmpG的OmpG变体，其中引入亲本序列中的变化由氨基酸216-227的缺失、氨基酸置换E229A和突变Y50K组成，且其中所述变体保留形成纳米孔的能力。

2.权利要求1的分离的OmpG变体，所述OmpG变体还包含聚合酶，其中所述聚合酶可操作地连接至所述变体OmpG。

3.权利要求1-2中的任一项的分离的OmpG变体，其中所述OmpG变体保留在脂质层中形成纳米孔的能力。

4.权利要求1-3中的任一项的分离的OmpG变体，其中所述变体包含SEQ ID NO:16的接头-His-SpyTag构建体。

5.一种分离的核酸，其包含编码SEQ ID NO:2的亲本OmpG的变体的多核苷酸序列，其中所述变体OmpG中引入亲本序列中的变化由氨基酸216-227的缺失、氨基酸置换E229A，和氨基酸置换Y50K组成。

6.一种借助于邻近感知电极的膜中的变体OmpG纳米孔对核酸样品测序的方法，所述方法包括：

(a) 将带标签的核苷酸提供至包含所述纳米孔的反应室，其中所述带标签的核苷酸的单个带标签的核苷酸包含与核苷酸偶联的标签，所述标签借助于所述纳米孔是可检测的；

(b) 借助于与所述变体OmpG纳米孔偶联的单个聚合酶进行聚合反应，由此将所述带标签的核苷酸的单个带标签的核苷酸掺入与来自所述核酸样品的单链核酸分子互补的生长链中；和

(c) 借助于权利要求1-4中的任一项的变体OmpG纳米孔，检测在所述单个带标签的核苷酸的掺入过程中与所述单个带标签的核苷酸结合的标签，其中当所述核苷酸与所述聚合酶结合时借助于所述纳米孔检测所述标签。

7.一种用于对核酸样品测序的芯片，所述芯片包含：多个根据权利要求1-4中的任一项的变体OmpG纳米孔，所述多个OmpG纳米孔设置在电极邻近或附近，其中所述纳米孔是可单独寻址的且具有附接到所述纳米孔的单个聚合酶；且其中单个纳米孔检测通过所述聚合酶向生长的核酸链中掺入核苷酸的过程中与带标签的核苷酸结合的标签。