[发明专利]α-溶血素变体

权利要求书

1.一种异寡聚体α-溶血素(αHL)七聚体，其包含至少一个在前寡聚化亚基和至少一个在后寡聚化亚基，每个寡聚化亚基包含至少一个αHL单体和/或至少一个αHL单体的多联体，所述寡聚化亚基具有在第一寡聚化结构域中的一个或多个突变，和在第二寡聚化结构域中的一个或多个突变；其中所述第一结构域和/或第二结构域上的所述突变中的至少一个是中断突变，其阻止所述至少一个在前寡聚化亚基和所述至少一个在后寡聚化亚基的自寡聚化。

2.权利要求1的异寡聚体αHL七聚体，进一步包含在所述至少一个在前寡聚化亚基的所述第一寡聚化结构域上的至少一个同源和/或挽救突变，和/或在所述至少一个在后寡聚化亚基的所述第二寡聚化结构域上的至少一个同源和/或挽救突变，其中所述至少一个同源和/或挽救突变决定所述至少一个在前寡聚化亚基和所述至少一个在后寡聚化亚基之间的亚基间接触以规定所述异寡聚体αHL七聚体中的寡聚化亚基的序列。

3.权利要求1或2的异寡聚体αHL七聚体，其中所述αHL七聚体由至少一个为αHL单体的多联体的在前寡聚化亚基形成，且至少一个在后亚基是至少一个αHL单体。

4.权利要求1或2的异寡聚体αHL七聚体，其中所述αHL七聚体由至少一个在前寡聚化亚基和至少一个在后寡聚化亚基形成，所述亚基各自为αHL单体的多联体。

5.权利要求1或2的异寡聚体αHL七聚体，其中所述至少一个在前寡聚化亚基和所述至少一个在后寡聚化亚基是αHL单体中的每一个。

6.权利要求1-5中的任一项的异寡聚体αHL七聚体，其中所述αHL单体和/或所述αHL单体的多联体包含一个或多个SEQ ID NO: 3的多肽。

7.权利要求1-6中的任一项的异寡聚体αHL七聚体，其中所述异寡聚体αHL七聚体保留在脂质双层中形成孔的能力。

8.权利要求1-7中的任一项的异寡聚体αHL七聚体，还包含聚合酶，所述聚合酶附接至所述至少一个在前或在后寡聚化亚基中的一个或多个。

9.权利要求1-8中的任一项的异寡聚体αHL七聚体，其中所述αHL单体和/或所述αHL单体的多联体包含一个或多个SEQ ID NO: 3的多肽，其中至少一个SEQ ID NO: 3的多肽是变体，所述变体还包含在与SEQ ID NO: 3的位置12或17对应的位置处的置换，其中所述置换包含一个或多个正电荷。

10.多个多核苷酸，其编码权利要求1-9中的任一项的异寡聚体αHL七聚体的所述至少一个在前寡聚化亚基和所述至少一个在后寡聚化亚基。

11.多个宿主细胞，其各自用表达载体转化或转染，所述表达载体编码权利要求10的所述多个多核苷酸中的每一个之一。

12.一种七聚体孔组件，其包含根据权利要求1-9中的任一项的异寡聚体αHL七聚体。

13.一种用于检测靶分子的方法，所述方法包括：

(a)提供包含纳米孔的芯片，所述纳米孔包含处于配置为与传感电极邻近或接近的膜中的根据权利要求12的七聚体孔组件；

(b)引导核酸分子穿入所述纳米孔，其中所述核酸分子与报告分子结合，其中所述核酸分子包含寻址区和探针区，其中所述报告分子与所述核酸分子在所述探针区结合，并且其中所述报告分子与靶分子偶联；

(c)在所述核酸分子被引导穿入所述纳米孔时测序所述寻址区，以确定所述寻址区的核酸序列；和

(d)借助于计算机处理器，基于在(c)中确定的所述寻址区的核酸序列鉴定所述靶分子。