[发明专利]抗蛋白酶的链霉亲和素

权利要求书

1.一种改性的链霉亲和素，其

(i)抗至少一种内肽酶的切割，其中所述至少一种内肽酶对碱性氨基酸是特异性的；和

(ii)呈现出10^-10M或更小的对生物素的解离常数K_D；

其中所述至少一种内肽酶优选选自LysC、LysN、ArgC和胰蛋白酶。

2.根据权利要求1所述的改性的链霉亲和素，其中所述至少一种内肽酶选自LysC、LysN和胰蛋白酶，并且其中一个或更多个赖氨酸残基携带选自以下的至少一种化学修饰：

(i)中和ε氨基的正电荷的化学修饰；和

(ii)取代ε氨基的氢的化学修饰。

3.根据权利要求2所述的改性的链霉亲和素，其中所述化学修饰是通过选自以下的化学反应生成的：

(i)赖氨酸残基的酰化，其生成酰基-赖氨酸；

(ii)赖氨酸残基的还原烷基化，其生成二烷基-赖氨酸；

(iii)赖氨酸残基与丙酸酐的反应，其生成丙酰赖氨酸；

(iv)赖氨酸残基与琥珀酸酐的反应，其生成赖氨酸二羧酸酐；

(v)赖氨酸残基的烷基化，其生成烷基-赖氨酸；

(vi)赖氨酸残基的脒化反应，其生成赖氨酸的乙脒衍生物。

4.根据权利要求1所述的改性的链霉亲和素，其中所述至少一种内肽酶选自LysC、LysN和胰蛋白酶，并且其中所述改性的链霉亲和素是根据SEQ ID NO：2所示的野生型链霉亲和素氨基酸序列的突变蛋白质，其中所述突变蛋白质的特征在于在SEQ ID NO：2的至少K121和K132位置处的氨基酸交换，并且其中所述突变蛋白质任选地包含1至10个内部氨基酸缺失、1至10个氨基酸插入、1至10个氨基酸交换、1至13个N端缺失、和/或1至20个C端缺失。

5.根据权利要求4所述的改性的链霉亲和素，其中K121和K132彼此独立地被另一种氨基酸置换，其中所述另一种氨基酸既不是赖氨酸也不是精氨酸；其中优选地，置换K121或K132的氨基酸彼此独立地选自丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸、缬氨酸、羟基脯氨酸、乙酰鸟氨酸、乙酰氨基-甲基-半胱氨酸、O-乙酰氨基-甲基-高丝氨酸、S-乙酰氨基-甲基-高半胱氨酸、乙酰赖氨酸、丙酰赖氨酸、羟乙酰赖氨酸、单氟乙酰赖氨酸、二氟乙酰赖氨酸、三氟乙酰赖氨酸、巴豆酰基赖氨酸和二甲基赖氨酸。

6.根据权利要求1至5中任一项所述的改性的链霉亲和素，其中所述至少一种内肽酶选自ArgC和胰蛋白酶，并且其中一个或更多个精氨酸残基携带选自以下的至少一种化学修饰：

(i)中和胍基的正电荷的化学修饰；和

(ii)取代胍基的一个或更多个氢的化学修饰。

7.根据权利要求6所述的改性的链霉亲和素，其中所述化学修饰是通过选自以下的化学反应生成的：

(i)精氨酸残基与二羰基化合物的反应，其生成改性的精氨酸残基；和

(ii)精氨酸残基的氨甲酰化，其生成氨甲酰化的精氨酸。

8.根据权利要求1、4或5中任一项所述的改性的链霉亲和素，其中所述至少一种内肽酶选自ArgC和胰蛋白酶，并且其中所述改性的链霉亲和素是根据SEQ ID NO：2所示的野生型链霉亲和素氨基酸序列的突变蛋白质，其中所述突变蛋白质的特征在于SEQ ID NO：2的R59、R84或R103位置上的一个或更多个氨基酸交换，并且其中所述突变蛋白质任选地包含1至10个内部氨基酸缺失、1至10个氨基酸插入、1至10个氨基酸交换、1至13个N端缺失、和/或1至20个C端缺失。