[发明专利]用于缀合抗体的转谷氨酰胺酶变体

权利要求书

1.一种制造抗体缀合物的方法，其包括：

a)在变体转谷氨酰胺酶存在下，将抗体与包含伯胺和选自蛋白质、放射性同位素、测定剂和药物的模块的胺供体化合物混合，所述变体转谷氨酰胺酶包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的氨基酸序列，条件是所述变体转谷氨酰胺酶具有选自下组的氨基酸取代特征：(A)E300A，(B)I240A和P241A，(C)E249Q，和(D)E300A和Y302A；和

b)容许所述变体转谷氨酰胺酶催化所述抗体的谷氨酰胺的侧链甲酰胺与所述胺供体化合物的伯胺之间形成酰胺键，由此制造抗体缀合物。

2.根据权利要求1的方法，其中所述抗体具有第295位的谷氨酰胺和第297位的糖基化天冬酰胺的IgG抗体(按照Kabat中的EU索引编号)。

3.根据权利要求1的方法，其中所述变体转谷氨酰胺酶具有选自下组的氨基酸取代特征：(B)I240A和P241A，(C)E249Q，和(D)E300A和Y302A。

4.根据权利要求1的方法，其中所述胺供体化合物中的模块是药物，优选DNA烷化剂、微管溶素、奥利斯达汀、烯二炔、吡咯并苯并二氮杂卓或美登木素生物碱化合物。

5.根据权利要求1的方法，其中所述胺供体化合物具有由式(I)表示的结构：

H₂N-(CH₂)_2-6D (I)

其中D是蛋白质、放射性同位素、测定剂或药物。

6.根据权利要求1的方法，其中所述胺供体化合物具有由式(Ia)表示的结构：

其中

D是药物，优选DNA烷化剂、微管溶素、奥利斯达汀、烯二炔、吡咯并苯并二氮杂卓、或美登木素生物碱化合物；

T是自消基团；

t是0或1；

AA^a和AA^b各自独立地选自下组：丙氨酸、β-丙氨酸、γ-氨基丁酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、γ-羧基谷氨酸、瓜氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、正亮氨酸、正缬氨酸、鸟氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸；

p是1、2、3或4；

q是1、2、3、4、5、6、7、8、9或10；

r是1、2、3、4或5；并且

s是0或1。

7.一种制造抗体缀合物的方法，其包括：

a)在变体转谷氨酰胺酶存在下，将抗体与第一化合物混合，其中第一化合物为具有伯胺和第一反应性官能团的胺供体化合物，所述变体转谷氨酰胺酶包含与SEQ ID NO:1至少90％相同的氨基酸序列，条件是所述变体转谷氨酰胺酶具有选自下组的氨基酸取代特征：(A)E300A，(B)I240A和P241A，(C)E249Q，和(D)E300A和Y302A；

b)容许所述变体转谷氨酰胺酶催化在所述抗体的谷氨酰胺的侧链甲酰胺与所述第一化合物的伯胺之间形成酰胺键，从而产生所述抗体与所述第一化合物的加合物；

c)使所述加合物与具有第二反应性官能团和选自蛋白质、放射性同位素、测定剂和药物的模块的第二化合物接触；所述第二反应性官能团能够与所述第一反应性官能团反应以在二者之间形成共价键；并且

d)容许所述第一反应性官能团和第二反应性官能团反应并在二者之间形成共价键，由此制造抗体缀合物。

8.根据权利要求7的方法，其中所述抗体是具有第295位的谷氨酰胺和第297位的糖基化天冬酰胺的IgG抗体(按照Kabat中的EU索引编号)。

9.根据权利要求7的方法，其中所述变体转谷氨酰胺酶具有选自下组的氨基酸取代特征：(B)I240A和P241A，(C)E249Q，和(D)E300A和Y302A。