[发明专利]提高重组蛋白的半乳糖含量的方法

权利要求书

1.一种用于提高哺乳动物细胞中产生的重组蛋白的半乳糖含量的方法，所述方法包括：

a)在细胞培养基中，在第一pH，培养哺乳动物细胞第一时间段直至活细胞密度为4.5至6.0×10⁶个细胞/ml，其中所述哺乳动物细胞用至少一个编码重组蛋白的重组核酸分子转化，其中所述细胞培养基不含任何半乳糖；

b)在不同于第一pH的第二pH，在所述细胞培养基中培养所述哺乳动物细胞第二时间段，其中所述第二pH比第一pH低0.05至0.3个pH单位；和

c)给(b)的培养物补料包含以下成分的组合物：

(i)尿苷；

(ii)锰盐；和

(iii)半乳糖；

其中，步骤(a)、(b)和(c)中的培养物的摩尔渗透压浓度低于400mOsm/kg。

2.一种用于在哺乳动物细胞中生产重组蛋白的方法，所述方法包括：

a)在细胞培养基中，在第一pH，培养哺乳动物细胞第一时间段直至活细胞密度为4.5至6.0×10⁶个细胞/ml，其中所述哺乳动物细胞用至少一个编码重组蛋白的重组核酸分子转化，其中所述细胞培养基不含任何半乳糖；

b)在不同于第一pH的第二pH，在所述细胞培养基中培养所述哺乳动物细胞第二时间段，其中所述第二pH比第一pH低0.05至0.3个pH单位；和

c)给(b)的培养物补料包含以下成分的组合物：

(i)尿苷；

(ii)锰盐；和

(iii)半乳糖；

其中，步骤(a)、(b)和(c)中的培养物的摩尔渗透压浓度低于400mOsm/kg；

d)收集包含重组蛋白的细胞培养物液体；和

e)获得重组蛋白。

3.根据权利要求2的方法，其中大规模地生产所述重组蛋白。

4.根据权利要求1至3任一项的方法，其中所述哺乳动物细胞是中国仓鼠卵巢细胞。

5.根据权利要求1至3任一项的方法，其中所述重组蛋白是含Fc蛋白。

6.根据权利要求1至3任一项的方法，其中组合物中的尿苷浓度为1至20mM。

7.根据权利要求1至3任一项的方法，其中所述锰盐是氯化锰(II)。

8.根据权利要求7的方法，其中组合物中的氯化锰(II)浓度为0.002mM至0.1mM。

9.根据权利要求1至3任一项的方法，其中组合物中的半乳糖浓度为5mM至100mM。

10.一种用于在中国仓鼠卵巢细胞中生产利妥昔单抗生物类似药抗体的方法，所述方法包括：

a)在细胞培养基中，在pH 7.15，培养中国仓鼠卵巢细胞第一时间段直至活细胞密度为4.5至6.0×10⁶个细胞/ml，其中所述细胞用一个或多个编码抗体的轻链和重链的重组核酸分子转化；

b)在pH 7.00，在细胞培养基中培养所述中国仓鼠卵巢细胞第二时间段；

c)给(b)的培养物补料包含以下成分的组合物：

(i)1至20mM尿苷；

(ii)0.002mM至0.1mM氯化锰(II)；和

(iii)5mM至100mM半乳糖；

其中，步骤(a)、(b)和(c)中的培养物的摩尔渗透压浓度低于400mOsm/kg；

d)收集包含利妥昔单抗的细胞培养物液体；和

e)获得利妥昔单抗生物类似药抗体。