[发明专利]包含长效红细胞生成素的组成物

权利要求书

1.一种EPO-Fc组成物，其包含EPO-Fc，所述EPO-Fc具有唾液酸含量为17mol/mol或者更多，以及100ng/mg或者更少的宿主细胞衍生的蛋白质杂质。

2.根据权利要求1所述的EPO-Fc组成物，其中，所述唾液酸含量范围为20至28mol/mol。

3.根据权利要求1所述的EPO-Fc组成物，其中，所述EPO-Fc具有pI≤6.0。

4.根据权利要求1所述的EPO-Fc组成物，其中，所述EPO-Fc具有4.5≤pI≤5.3。

5.根据权利要求1所述的EPO-Fc组成物，其中，所述宿主细胞衍生的蛋白质杂质是EPO-Fc的凝集物或片段。

6.根据权利要求1所述的EPO-Fc组成物，其中，所述宿主细胞衍生的蛋白质杂质的量为含有60ng/mg或者更少。

7.根据权利要求1所述的EPO-Fc组成物，其还包含0.5ng/mg或者更少的宿主细胞衍生的DNA杂质。

8.一种制备EPO-Fc组成物的方法，包括：

在温度范围35℃至39℃和6.5≤pH≤7.5的条件下，以4vvd或更低的流动率流动EPO-Fc细胞培养溶液以制备灌注培养溶液；

从所述灌注培养溶液获得EPO-Fc纯溶液；和

将所述EPO-Fc纯溶液吸附到阴离子交换树脂以制备Q流出物，所述Q流出物包括具有唾液酸含量为17mol/mol或者更多的EPO-Fc。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述Q流出物的制备包括：将所述EPO-Fc吸附到所述阴离子交换树脂；并使用含有0.005至0.02M磷酸钠、0.05至0.2M L-精氨酸和0.02至0.1M氯化钠，并且具有6.7≤pH≤7.1的缓冲液洗脱所吸附的EPO-Fc。

10.根据权利要求8所述的方法，其中获得EPO-Fc纯溶液的步骤包括使所述灌注培养溶液通过POD滤器。

11.根据权利要求8所述的方法，其中，所述EPO-Fc组成物中的宿主细胞衍生蛋白质(HCP)杂质的量为100ng/mg或者更少。

12.根据权利要求8所述的方法，其中，将所述EPO-Fc细胞培养溶液以2.0×10⁵细胞/mL或者更多的量接种到培养箱。

13.根据权利要求10所述的方法，还包括，使所述灌注培养溶液通过所述POD滤器之后，使所述溶液通过经填充有蛋白A键合树脂的管柱。

14.根据权利要求8所述的方法，其中，所述Q流出物中所含的EPO-Fc具有pI为6.0或者更低。

15.根据权利要求8所述的方法，还包括分别使用POD滤器、超滤膜和纳米滤器过滤所述Q流出物。