[发明专利]用于分析样品以检测布鲁塞尔酒香酵母物种的亚硫酸盐/酯抗性酵母的存在的方法以及用于实施该方法的试剂盒

权利要求书

1.用于分析样品中布鲁塞尔酒香酵母(Brettanomyces bruxellensis)物种的亚硫酸盐/酯抗性酵母的可能存在的分析方法，其特征在于，其包括：

-检测所述样品中属于酿酒学三倍体酵母遗传群的布鲁塞尔酒香酵母物种酵母的可能存在的步骤，

-以及，如果检测到这样的存在，则推断所述样品包含抗亚硫酸盐/酯的布鲁塞尔酒香酵母物种酵母。

2.根据权利要求1所述的分析方法，其中所述检测步骤包括检测所述样品中包含的酵母的酿酒学三倍体酵母遗传群的布鲁塞尔酒香酵母物种酵母特异性的分子标志物。

3.根据权利要求2所述的分析方法，其中所述分子标志物与具有氨基酸序列SEQ IDno.1的蛋白质相关。

4.根据权利要求2至3中任一项所述的分析方法，其中所述分子标志物由序列SEQ IDno.2的核苷酸序列或者与所述序列SEQ ID no.2在序列的80％或更多上具有大于或等于90％的同源性程度的任何核苷酸序列的至少90个连续核苷酸的任何区段构成。

5.根据权利要求2至4中任一项所述的分析方法，其中所述检测步骤包括：

-从所述样品中包含的酵母提取核酸，

-通过聚合酶链式反应扩增含有所述分子标志物的基因座，

-以及检测如此扩增的DNA中的所述分子标志物。

6.根据权利要求5所述的分析方法，其中所述聚合酶链式反应使用序列包含选自序列SEQ ID no.3和SEQ ID no 4的序列的至少一种核苷酸引物。

7.根据权利要求2至6中任一项所述的分析方法，其中所述检测步骤包括：

-从所述样品中分离布鲁塞尔酒香酵母物种酵母的菌落，

-从这些菌落中的每一个提取核酸，

-以及在如此获得的每一种核酸提取物中检测所述分子标志物。

8.根据权利要求2至7中任一项所述的分析方法，其包括验证进行了所述分子标志物的检测的酵母属于布鲁塞尔酒香酵母物种的步骤。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的分析方法，其中所述检测步骤包括确定所述样品中存在的属于酿酒学三倍体酵母遗传群的布鲁塞尔酒香酵母物种酵母的数量的确定步骤。

10.根据权利要求9所述的分析方法，其中所述确定步骤通过定量聚合酶链式反应来实现。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的分析方法，其包括确定所述样品中存在的布鲁塞尔酒香酵母物种酵母的数量的步骤。

12.能够通过聚合酶链式反应扩增属于酿酒学三倍体酵母遗传群的布鲁塞尔酒香酵母物种酵母特异性的核苷酸序列的核苷酸引物对用于分析样品中布鲁塞尔酒香酵母物种的亚硫酸盐/酯抗性酵母的可能存在的用途。

13.根据权利要求12所述的用途，其中所述核苷酸引物对能够扩增序列SEQ ID no.2的核苷酸序列或者与所述序列SEQ ID no.2在序列的80％或更多上具有高于或等于90％的同源性程度的任何核苷酸序列的至少90个连续核苷酸的区段。

14.用于实施根据权利要求1至11中任一项所述的分析方法的试剂盒，其特征在于，其包含：

-用于通过聚合酶链式反应扩增属于酿酒学三倍体酵母遗传群的布鲁塞尔酒香酵母物种酵母特异性的核苷酸序列的核苷酸引物对；

-以及用于通过聚合酶链式反应扩增证明酵母属于布鲁塞尔酒香酵母物种的核苷酸序列的核苷酸引物对。

15.根据权利要求14所述的试剂盒，其包含：

-用于通过聚合酶链式反应扩增序列SEQ ID no.2的核苷酸序列或者与所述序列SEQID no.2在序列的80％或更多上具有高于或等于90％的同源性程度的任何核苷酸序列的至少90个连续核苷酸的区段的核苷酸引物对，

-和/或分别包含序列SEQ ID no.5和序列SEQ ID no.6的序列的核苷酸引物对。