[发明专利]固相肽合成中的改进

说明书

公开了一种在固相肽合成中的脱保护的改进方法。特别地，将高浓度和小体积的脱保护组合物添加至偶联溶液、生长中的肽链和来自在前的偶联循环的任何过量的活化酸的混合物中，并且在前一循环的偶联步骤和用于连续循环的脱保护组合物的添加之间没有任何排出步骤。此后，利用真空吸力来降低容器中的环境压力从而在没有任何排出步骤的情况下除去脱保护组合物，并且不会另外不利地影响容器中的剩余的物料或在SPPS循环中的后续步骤中引起问题。

技术领域

本发明涉及固相肽合成(“SPPS”)中的改进。

背景技术

肽为连接的氨基酸链，而氨基酸反过来又是大部分生物体的基本结构单元。肽还是蛋白质的前体；即，氨基酸的长复合链。肽和蛋白质对于人类和动物生命是必要的，并且它们驱动、影响或控制各种自然过程。

仅作为一个实例，最近已经鉴定肽在某些癌症中可以“锁定”肿瘤特异性突变并且因此用作肿瘤特异性疫苗(例如，SAMPSON,JH ET AL.An epidermal growth factorreceptor variant III-targeted vaccine is safe and immunogenic in patientswith glioblastoma multiforme.Mol.Cancer Ther.2009；8:2773-2779；Li G,SlDDHARTHAM,WONG AJ.The epidermal growth factor variant III peptide vaccine fortreatment of malignant gliomas.Neurosurg.Clin.N.Am.2010；21:87-93；Li G,WONGAJ.EGF receptor variant III as a target antigen for tumorimmunotherapy.Expert Rev.Vaccines 2008；7:977-985)。

结果，肽和蛋白质的研究以及合成肽和蛋白质的能力在生物科学和医学中具有重大意义。

在概念上，固相合成是相对简单和直接的。将氨基酸通过酸侧的连接基团连接至固相颗粒，并且连接至胺侧的保护基团。将保护基团除去从而使第二酸(并且特别是其酸基)可以偶联至在原酸上的胺基。第二(以及随后的)酸起初也是受保护的，因此通常的顺序为脱保护、偶联、并且重复直至完成期望的肽，其后将完成的肽从固相树脂裂解。

固相肽合成起源于1963年，当时R.B.Merrifield发表了使用固相法合成四酸链(R.B.MERRIFIELD；Solid Phase Peptide Synthesis.I.The Synthesis of aTetrapeptide；J.Am.Chem.Soc,1963,85(14),pp 2149-2154)。

当时，普遍认识到的是有机反应可以以该方式进行，但是认为Merrifield法将难以适应任何实际纯度的较长的肽序列。具体地，认为Merrifield的建议，即在偶联和脱保护步骤之间的分离步骤可以仅通过洗涤来进行并且无需中间体的鉴定，不太可能提供长期的成功。在肽合成中，两个问题是特有的：(1)不需要的副产物的合成；和(2)基于来自前一步骤或循环的未除去的酸的存在，一部分不期望的序列的合成。特别地，新近添加的(“活化的”)酸的残余物在偶联步骤之后倾向于残留，并且因此必须以某种方式除去。

然而，如由CHAN AND WHITE,Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis(OxfordUniversity Press 2000)总结的，洗涤步骤提供可接受的纯度，并且这些洗涤步骤和避免详细表征中间体的通用的简化性为SPPS法提供了速度和效率优势(例如，第1页)。