[发明专利]用于测量色氨酸及其代谢物的同位素方法

说明书

色氨酸降解是控制免疫反应的关键代谢途径，并且证据表明在癌症进展过程中，色氨酸代谢物的产生可能是以自分泌方式促进癌症细胞的恶性表型的免疫逃避的基础。本发明涉及测量质量标签标记的色氨酸及其代谢物的方法，以及使用标记的分子监测受试者治疗的有效性和治疗后疾病复发、用于分层患者和用于诊断受试者免疫响应抑制的方法。

技术领域

本发明涉及测量质量标签标记的色氨酸及其代谢物的方法，以及使用标记的分子在受试者中监测治疗和治疗后疾病复发的有效性、用于分层患者和诊断受试者中免疫响应的抑制的方法。

背景技术

作为癌症新标志的“躲避免疫系统破坏(evading immune destruction)”的最近定义反映了对免疫抑制和逃避作为恶性肿瘤的关键特征有越来越多的认识(1)。在过去的几年中，色氨酸降解已经成为控制免疫反应的关键代谢途径。新出现的证据表明，在癌症进展过程中，经由色氨酸分解代谢酶吲哚胺-2,3-双加氧酶(IDO)和/或色氨酸-2,3-双加氧酶(TDO)的犬尿氨酸产生可代表免疫逃避的核心途径，同时也以自分泌的方式促进癌症细胞的恶性表型(2，3)。尽管最近才发现TDO在癌症中的作用(3)，但是基于小鼠癌症模型中的临床前研究(5)，目前正在临床试验中对IDO抑制剂1-甲基-色氨酸结合常规化疗或免疫疗法进行研究(4)。

目前正在开发用于治疗癌症的IDO和TDO抑制剂，并且实体瘤中使用IDO抑制剂作为化疗或免疫疗法辅助手段的临床试验目前正在进行。另外，色氨酸降解已经涉及几种靶向疗法的效果。最近的证据表明酪氨酸激酶抑制剂伊马替尼减少了IDO表达，而IDO代表易普利姆玛(ipilimumab)针对CTLA-4阻断的抗性机制。

虽然抑制色氨酸降解作为抑制癌症免疫逃避的手段被研究，但是色氨酸降解的诱导涉及控制自身免疫疾病(6)、过度炎症疾病耐受性(7)、慢性感染和过敏。

随着调节色氨酸降解的治疗变得可用，对于将患者针对治疗分层以及评估治疗功效而言，有效且精确地测量色氨酸降解的方法变得越来越相关。

通过HPLC、GC-MS或LC-MS常规测量色氨酸及其代谢物。存在基于紫外吸收的HPLC方法，以及特定修饰物质的基于荧光的方法(11-14)。每种方法都有其特定的优点和缺点，这里不详细讨论。然而，当应用质谱方法时，由于除了LC分离和特定片段检测(例如在MS2模式下)外还具有亚ppm精确度的精确质量测量，因此通常可以预期更高的特异性。描述了用于检测色氨酸和连接的分析物的这种基于LC-MS的方法(15-18)。已经建立了基于选择性反应监测(SRM)的方法以使用同位素标记的标准物而能够高灵敏度和高精确度地测量色氨酸和几种代谢物，而且还描述了基于SIM扫描的LC-ESI-MS方法(18)。

因此，仍然需要测量色氨酸及其代谢物的方法，该方法可以以优异的特异性、灵敏度和通量进行。

发明内容

因此，本发明的第一方面提供了用胺反应性质量标签标记的色氨酸和/或其一种或多种代谢物，所述胺反应性质量标签增强质谱中的信号强度。

在本发明第一方面的一种实施方案中，色氨酸和/或其一种或多种代谢物包含：

i.L-色氨酸；

ii.D-色氨酸；

iii.1-L-甲基-色氨酸；

iv.1-D-甲基色氨酸；

v.L-犬尿氨酸；

vi.D-犬尿氨酸；

vii.1-L-甲基-犬尿氨酸；

viii.1-D-甲基-犬尿氨酸。

质量标签可以是同量异序标签或同位素质量标签。优选地，质量标签是包含氢、碳、氮和/或氧的一个或多个重同位素取代的二甲基哌啶-β-丙氨酸衍生物。