[发明专利]基于人呼吸道合胞病毒(HRSV)病毒样颗粒(VLPS)的疫苗

说明书

本申请描述了在其表面展示抗原性副粘病毒(如，RSV和/或MPV)蛋白的病毒样颗粒。还描述了制备和使用这些VLP的方法。

相关申请的交叉引用

本申请要求2015年08月31日提交的美国临时申请号62/212,306的优先权，其内容通过引用全文纳入本文。

有关联邦资助的研究的声明

本发明部分地得到国立卫生研究院(National Institute of Health)的一项或多项资助。美国政府可享有本发明的某些权利。

技术领域

本发明涉及包含人呼吸道合胞病毒(hRSV)病毒样颗粒(VLP)的组合物、制备和使用这些hRSV VLP的方法，其包括产生和生产基于hRSV VLP的疫苗。具体而言，本公开包括用于开发新型基于VLP的疫苗系统的策略和方法，该系统能保护人类免受不同hRSV血清型(A和B型)的感染。本文还描述了生产展示某些优化抗原性构型的VLP和佐剂配方的方法。这些VLP特征性地具有构象表位，所述构象表位与产生增强的中和免疫应答相关。可在已瞬时或稳定转染蛋白质表达载体的真核细胞的悬浮培养物中生产VLP疫苗。VLP在细胞膜组装，并释放到培养基中。经纯化、浓缩和配制之后，可通过适当的途径给予疫苗(例如通过粘膜或胃肠道外途径)，并引起能抗hRSV病毒血清型A和B型感染保护的免疫应答。

背景技术

人呼吸道合胞病毒(RSV)导致世界性严重小儿肺病的首要原因。几乎所有婴儿在2岁之前都至少被RSV感染一次。RSV感染的临床谱范围从上呼吸道中的鼻炎覆盖到下呼吸道中的肺炎和支气管炎。全球范围内的流行病学研究显示2-5％RSV感染儿童需要住院，在早产儿中具有最严重的发病率和致死性比例失调影响。RSV疾病每年导致100,000～200,000例死亡。据信，严重RSV感染会使儿童易于发生喘鸣以及未来疾病和可能的哮喘。重要的是，RSV感染引发中和抗体和T细胞应答，其仅可持续有限的时间段；由此，患者时常对重复感染没有保护能力。并且，老年人在重复感染时显示严重RSV疾病的高风险，其具有很高的致病性和致死率。CDC报道称RSV感染在美国65周岁以上的成人中每年导致177,000例住院和14,000例死亡。

呼吸道合胞病毒是一种单链负义非分段包膜RNA病毒，其被分类为副粘病毒科肺病毒属的一员。病毒基因组(15,522个核苷酸)编码11种蛋白质，8种结构蛋白(N、P、M、M2-1、SH、G、F和L)以及3种非结构蛋白(NS1、NS2、M2-2)。基因组核包含在病毒包膜中，该包膜以M蛋白为主，点缀有三种表面跨膜糖蛋白G、F和SH。G蛋白是主要的附着蛋白，而F蛋白则介导膜融合以及随后的复制合胞体形成。RSV A和B亚群间的抗原二态性(antigenicdimorphism)主要与G蛋白相关，而F蛋白与这两个亚群之间的关系更紧密。G蛋白和F蛋白包含在受感染宿主中引发部分保护性抗体应答的抗原决定簇。G蛋白上的抗原变化是区分两种RSV亚型A和B的主要决定因素。这两种亚型在人体内循环，可能具有类似的发生率和毒性。F蛋白和G蛋白带有某些CTL表位以及抗原性位点，可引发中和抗体。高效价血清中和抗体防止了下呼吸道的RSV感染，为此提供了作为保护相关性的证据。此外，市售预防性MAb帕丽珠单抗靶向高度保守F蛋白中的中和表位。这些数据提供了选择这些RSV表面抗原作为待掺入VLP疫苗表面上的目标物的理由。并且，展示在病毒体表面上的F蛋白迅速改变构象，由融合前亚稳态形式改变为更为稳定的融合后结构。近期研究显示融合前构象具有瞬时表位，与融合后结构所引发出的抗体相比，其能引发出具有更高中和力度的抗体。这些数据为疫苗开发提供了新视角。RSV VLP描述于例如美国专利公开号20080233150和20110097358中。