[发明专利]用于制备视网膜色素上皮细胞的方法

权利要求书

1.视网膜色素上皮细胞的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)第一步，在包含FGF受体抑制剂和/或MEK抑制剂的培养基中培养多能干细胞达不多于30天的时间，和

(2)第二步，在Nodal信号转导通路抑制剂和/或Wnt信号转导通路抑制剂的存在下培养在所述第一步中得到的细胞以形成视网膜色素上皮细胞。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其中所述第一步在无血清条件下进行。

3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其中所述第一步在不存在饲养细胞的情况下进行。

4.根据权利要求1至3中任一项所述的制备方法，其中所述第一步中的培养基还包含用于维持未分化状态的因子。

5.根据权利要求4所述的制备方法，其中用于维持未分化状态的所述因子是FGF信号转导通路激动剂。

6.根据权利要求5所述的制备方法，其中所述FGF信号转导通路激动剂是bFGF。

7.根据权利要求1至6中任一项所述的制备方法，其中所述FGF受体抑制剂是选自由PD173074和SU5402组成的组的至少一种类型。

8.根据权利要求1至7中任一项所述的制备方法，其中所述MEK抑制剂是选自由PD0325901、PD184352、U0126、TAK-733和AZD-8330组成的组的至少一种类型。

9.根据权利要求1至8中任一项所述的制备方法，其中所述Nodal信号转导通路抑制剂是Alk4、5或7抑制剂。

10.根据权利要求9所述的制备方法，其中所述ALK4、5或7抑制剂是SB431542。

11.根据权利要求1至10中任一项所述的制备方法，其中所述Wnt信号转导通路抑制剂是CKI-7。

12.根据权利要求1至11中任一项所述的制备方法，其中所述多能干细胞是灵长类动物多能干细胞。

13.根据权利要求1至12中任一项所述的制备方法，其中所述多能干细胞是人多能干细胞。

14.根据权利要求1至13中任一项所述的制备方法，其中所述第一步中的培养基是还包含BMP受体抑制剂的培养基。

15.根据权利要求14所述的制备方法，其中所述BMP受体抑制剂是ALK2/3抑制剂。

16.根据权利要求15所述的制备方法，其中所述ALK2/3抑制剂是LDN193189。

17.根据权利要求1至16中任一项所述的制备方法，其中所述第一步中的培养基还包含Sonic hedgehog信号转导通路激动剂。

18.根据权利要求17所述的制备方法，其中所述Sonic hedgehog信号转导通路激动剂是SAG。

19.根据权利要求1至18中任一项所述的制备方法，其中所述第一步中的培养基还包含PKC抑制剂。

20.根据权利要求19所述的制备方法，其中所述PKC抑制剂是Go6983。

21.根据权利要求1至20中任一项所述的制备方法，其中所述第一步中的培养时间是2天至13天。