[发明专利]用于制备视网膜色素上皮细胞的方法

说明书

本发明提供用于更有效地由多能干细胞制备视网膜色素上皮细胞的方法。用于制备视网膜色素上皮细胞的本发明的方法包括以下步骤：(1)第一步，在包含FGF受体抑制剂和/或MEK抑制剂的培养基中培养多能干细胞达不多于30天的时间，和(2)第二步，在Nodal信号转导通路抑制剂和/或Wnt信号转导通路抑制剂的存在下培养在所述第一步中得到的细胞以形成视网膜色素上皮细胞。

[技术领域]

本发明涉及制备视网膜色素上皮(RPE)细胞的方法等。

[背景技术]

视网膜色素上皮细胞是存在于视网膜的最外层的色素上皮细胞，并且在光感受器细胞的维持如光感受器细胞外节(outer segment)的吞噬和视觉物质的再循环等方面起重要作用。由归因于衰老等的视网膜色素上皮细胞异常导致的老年性黄斑变性(Age-relatedmacular degeneration)是导致中枢视觉丧失或失明的眼科疾病，并且需要开发用于治疗其的有效方法。近来，作为用于治疗老年性黄斑变性的新型方法，补充或替换视网膜色素上皮细胞的细胞移植治疗已经吸引了很多注意，并且已经预期使用视网膜色素上皮细胞作为用于细胞治疗的移植材料。迄今为止，尽管已经做出了关于使用人多能干细胞诱导向视网膜色素上皮细胞的分化的方法的一些报道(非专利文献1和2，专利文献1、2、3和4)，因为在再生医学行业中需要用于稳定制备大量高品质视网膜色素上皮细胞的技术，所以需要更高效且方便的制备方法。

[文献列表]

[专利文献]

专利文献1:WO 2012/173207

专利文献2:WO 2015/053375

专利文献3:WO 2015/053376

专利文献4:US 2013/0224156

[非专利文献]

非专利文献1：Stem Cell Reports,2(2),205-218(2014)

非专利文献2：Cell Stem Cell,10(6),771-785(2012)

[发明概述]

[本发明要解决的问题]

为了稳定制备大量来源于多能干细胞的视网膜色素上皮细胞，当所述细胞用于再生医学等时，迫切需要开发更高效的方法。

[解决问题的手段]

考虑到所述情况，本发明的发明人进行了深入的研究，结果完成了本发明。

也就是说，本发明涉及以下各项。

[1]视网膜色素上皮细胞的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：

(1)第一步，在包含FGF受体抑制剂和/或MEK抑制剂的培养基中培养多能干细胞达不多于30天的时间，和

(2)第二步，在Nodal信号转导通路抑制剂和/或Wnt信号转导通路抑制剂的存在下培养在所述第一步中得到的细胞以形成视网膜色素上皮细胞。

[2]根据上述[1]所述的制备方法，其中所述第一步在无血清条件下进行。

[3]根据上述[1]或[2]所述的制备方法，其中所述第一步在不存在饲养细胞的情况下进行。

[4]根据上述[1]至[3]中任一项所述的制备方法，其中在所述第一步中的所述培养基还包含用于维持未分化状态的因子。

[5]根据上述[4]所述的制备方法，其中用于维持未分化状态的所述因子是FGF信号转导通路激动剂。

[6]根据上述[5]所述的制备方法，其中所述FGF信号转导通路激动剂是bFGF。