[发明专利]用于治疗青光眼的方法和组合物

权利要求书

1.一种治疗受试者的青光眼或其症状的方法，该方法包括向该受试者的眼睛施用：

a)与基因的靶位点杂交的指导RNA，其中所述基因编码促成青光眼或其症状的蛋白质；以及

b)在所述靶位点切割所述基因的链的Cas核酸酶，

其中切割所述链改变所述基因的表达，从而减少所述蛋白质对青光眼或其症状的贡献。

2.根据权利要求1所述的方法，包括施用修复模板以代替所述基因的一部分。

3.根据权利要求1所述的方法，包括减少所述蛋白质的表达或降低所述蛋白质的活性。

4.根据权利要求1所述的方法，其中所述方法导致减少眼睛中的视网膜神经节细胞衰老。

5.根据权利要求1所述的方法，包括在选自载体、脂质体和核糖核蛋白的递送媒介物中施用编码所述Cas核酸酶的多核苷酸和所述指导RNA。

6.根据权利要求1所述的方法，其中所述基因为p16基因。

7.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者携带野生型p16基因的p16等位基因变体，其中所述野生型p16基因包含SEQ ID NO.36的编码序列。

8.根据权利要求7所述的方法，其中所述p16等位基因变体携带促成青光眼或其症状的单核苷酸多态性。

9.根据权利要求8所述的方法，其中所述单核苷酸多态性为rs1042522处的丙氨酸残基。

10.根据权利要求6所述的方法，其中所述指导RNA将所述Cas核酸酶靶向选自SEQ IDNO：17-35的p16基因的序列。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述基因为Six6基因。

12.根据权利要求1所述的方法，其中所述受试者携带野生型p16基因的p16等位基因变体，其中所述野生型p16基因包含SEQ ID NO.37的编码序列。

13.根据权利要求12所述的方法，其中所述Six6基因包含rs33912345处胞嘧啶的单核苷酸多态性。

14.一种治疗受试者的青光眼的方法，该方法包括向该受试者的眼睛施用与p16信使RNA杂交的反义寡核苷酸，从而经由RNA干扰减少p16基因的表达。

15.根据权利要求14所述的方法，其中减少p16基因的表达减少了视网膜神经节细胞衰老。

16.根据权利要求15所述的方法，其中视网膜神经节细胞衰老减少约10％至约90％。

17.根据权利要求15所述的方法，其中视网膜神经节细胞衰老减少至少约40％。

18.根据权利要求14所述的方法，其中所述反义寡核苷酸为由选自SEQ ID NO：9-13的序列编码的短发夹RNA。

19.根据权利要求14所述的方法，其中所述反义寡核苷酸在多核苷酸载体、脂质体或核糖核蛋白中施用。

20.一种用于治疗青光眼的药物组合物，其包含：

a.编码Cas蛋白的多核苷酸；以及

b.与选自p16基因和Six6基因的基因的一部分互补的指导RNA。

21.根据权利要求20所述的药物组合物，其包含修复模板，其中所述指导RNA将所述Cas蛋白靶向所述基因，从而导致所述基因的Cas介导的切割和所述修复模板的插入。