[发明专利]用于治疗青光眼的方法和组合物

说明书

本文公开了通过干扰眼部细胞中的基因如p16的表达来治疗青光眼的方法和药物组合物。这些方法和组合物采用基于核酸的疗法。

交叉引用

本申请要求2015年9月10日提交的美国临时申请号62/216,374的权益，该临时申请通过引用并入本文。

背景技术

青光眼是致盲的神经退行性疾病。青光眼的风险因素包括升高的眼内压(IOP)、年龄和遗传学。青光眼的特征在于加速和渐进性的视网膜神经节细胞(RGC)死亡。尽管研究了数十年，但青光眼中RGC死亡的机理仍不清楚。

原发性开角型青光眼(POAG)是一组进行性视神经病，其特征在于视网膜神经节细胞(RGC)及其轴突的缓慢而渐进的退化，这导致视神经盘的独特外观和伴随形式的视力损失(Zhang等人，2012)。POAG是西方世界中最常见的青光眼类型，是世界范围内失明的一个主要原因，以及非裔美国人中失明的主要原因(Kwon等人，2009)。IOP和年龄是POAG的形成和发展的主要风险因素。

发明内容

本文公开了治疗受试者的青光眼或其症状的方法，该方法包括向该受试者的眼睛施用：与基因的靶位点杂交的指导RNA，其中所述基因编码促成青光眼或其症状的蛋白质；以及在所述靶位点切割所述基因的链的Cas核酸酶，其中切割所述链改变所述基因的表达，从而减少所述蛋白质对青光眼或其症状的贡献。在一些实施方案中，所述方法包括施用修复模板以代替所述基因的一部分。在一些实施方案中，所述方法包括减少所述蛋白质的表达或降低所述蛋白质的活性。在一些实施方案中，所述方法导致减少眼睛中的视网膜神经节细胞衰老。在一些实施方案中，所述方法包括在选自载体、脂质体和核糖核蛋白的递送媒介物中施用编码Cas核酸酶的多核苷酸和指导RNA。在一些实施方案中，所述基因为p16基因。在一些实施方案中，受试者携带野生型p16基因的p16等位基因变体，其中所述野生型p16基因包含SEQ ID NO.36的编码序列。在一些实施方案中，p16等位基因变体携带促成青光眼或其症状的单核苷酸多态性。在一些实施方案中，单核苷酸多态性为rs1042522处的丙氨酸残基。在一些实施方案中，指导RNA将Cas核酸酶靶向选自SEQ ID NO：17-35的p16基因的序列。在一些实施方案中，所述基因为Six6基因。在一些实施方案中，受试者携带野生型p16基因的p16等位基因变体，其中所述野生型p16基因包含SEQ ID NO.37的编码序列。在一些实施方案中，Six6基因包含rs33912345处胞嘧啶的单核苷酸多态性。

本文进一步公开了治疗受试者的青光眼的方法，该方法包括向该受试者的眼睛施用与p16信使RNA杂交的反义寡核苷酸，从而经由RNA干扰减少p16基因的表达。在一些实施方案中，减少p16基因的表达减少了视网膜神经节细胞衰老。在一些实施方案中，视网膜神经节细胞衰老减少约10％至约90％。在一些实施方案中，视网膜神经节细胞衰老减少至少约40％。在一些实施方案中，反义寡核苷酸为由选自SEQ ID NO：9-13的序列编码的短发夹RNA。在一些实施方案中，反义寡核苷酸在多核苷酸载体、脂质体或核糖核蛋白中施用。