[发明专利]用于从植物材料获得富含小RNA的含水提取物的方法和源自该方法的提取物

权利要求书

1.用于从植物材料获得富含具有150个核苷酸的最大长度的小RNA且不包含DNA的含水提取物的方法，其包括以下步骤：

a)使植物材料与水接触；

b)在pH为10.5和11之间，将浓度为2和15mM之间的乙二胺四乙酸(EDTA)四钠添加至a)中获得的混合物中，在搅拌下在20至80℃的温度下进行至少1小时的时间；

c)然后，将b)中获得的混合物的pH调节至6和8之间的值；

d)纯化c)中获得的混合物，以便除去残余固体植物材料并获得纯化的含水粗提取物；和

e)检查pH并如果必要重新调节至6和8之间的值，

其中在进行步骤e)之前通过将过滤截止值从20-50μm降低至0.1-0.30μm来依次过滤d)中获得的含水粗提物。

2.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤e)中，检查pH并调节至6和6.5之间的值。

3.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤a)中，使植物材料与水以4至20％(重量/重量)的植物材料/水比率接触。

4.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤d)中，将c)中获得的混合物离心。

5.根据权利要求1所述的方法，其中其包括在步骤c)之前直接对b)中获得的混合物，或者对b)中获得的混合物的离心并除去剩余的植物材料之后的上清液进行额外水解步骤，通过选自纤维素酶和/或蛋白酶的至少一种酶在45至65℃的温度下且在6至8.5的pH下作用至少1小时。

6.根据权利要求5所述的方法，其中其包括在65至80℃的温度下使酶失活至少1小时的步骤，该失活步骤直接在水解步骤之后或在步骤e)之前依次过滤步骤之间进行。

7.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤d)之前将浓度为10至20g/kg的硅藻土或二氧化硅添加至所述混合物中。

8.根据权利要求1所述的方法，其中EDTA四钠的浓度为10mM。

9.根据权利要求1所述的方法，其中在步骤a)中与水接触之前，将植物材料压碎。

10.根据权利要求1所述的方法，其中所述植物材料是选自种子、果实、鳞茎、花、叶、根、胚芽或选自油饼和糟的植物部分。

11.根据权利要求1所述的方法，其中所述植物材料选自西番莲科(Passifloraceae)、锦葵科(Malvaceae)、石榴科(Punicaceae)、猕猴桃科(Actinidiaceae)、桃金娘科(Myrtaceae)、金丝桃科(Clusiaceae)、番木瓜科(Caricaceae)、Malphigiaceae、杜鹃花科(Ericaceae)、茶藨子科(Grossulariaceae)、茄科(Solanaceae)、禾本科(Poaceae)、豆科(Fabaceae)、锦葵科(Malvaceae)、木棉科(Bombacaceae)、葫芦科(Cucurbitaceae)、藜科(Chenopodiaceae)、蔷薇科(Rosaceae)、芸香科(Rutaceae)、百合科(Liliaceae)、鸢尾科(Iridaceae)、石蒜科(Amaryllidaceae)、葱科(Alliaceae)。

12.根据权利要求11所述的方法，其中所述植物材料选自以下物种：咖啡黄葵(Hibiscus esculentus)、猴面包树(Adansonia digitata)、昆诺藜(Chenopodiumquinoa)、小扁豆(Lens esculenta)、水稻(Oryza sativa)、南瓜(Cucurbita pepo)、洋蔷薇(Rosa centifolia)、酸橙(Citrus aurantium)、白百合(Lilium candidum)、卷丹百合(Lilium tigrinum)、翅茎西番莲(Passiflora alata)。