[发明专利]用于从植物材料获得富含小RNA的含水提取物的方法和源自该方法的提取物

说明书

本发明涉及用于从植物材料获得富含具有150个核苷酸的最大长度的小RNA的含水提取物的方法。本发明的特征在于其包括以下步骤，根据所述步骤：a)使植物材料与水接触；b)将乙二胺四乙酸(EDTA)四钠添加至a)中获得的10.5和11之间的pH的混合物中；c)然后，将b)中获得的混合物的pH调节至6和8之间的值；d)纯化c)中获得的混合物，以便除去植物材料并回收含水粗提取物；和e)检查pH并重新调节(如果必要)至6和8之间的值。本发明还涉及可以通过这种方法获得的富含具有150个核苷酸的最大长度的小RNA的植物材料的含水提取物，以及包含这种提取物的组合物，和其用于防治皮肤衰老迹象和用于改善皮肤的水合作用的美容用途。

技术领域

本发明涉及从植物材料获得富含具有150个核苷酸(nt)的最大长度的小RNA(核糖核酸)的含水提取物的方法，源自这种方法的提取物以及包含此类提取物的组合物和它们的美容用途。

背景技术

在实验室中并且因此小规模进行的用于提取核糖核酸(RNA，低分子量RNA)的常规方案必须在化学罩下进行，因为这些方法涉及使用有毒且不被认为是化妆品溶剂的溶剂诸如苯酚和氯仿(Zumbo,P.2014Phenol-chloroform Extraction,2014)。将这些溶剂添加至裂解细胞或非常精细压碎的植物或动物组织的水相中，或者直接添加至在液氮存在的情况下产生的压碎制备物中。将因此获得的溶液在4℃下以近似10,000g的高速离心，以产生两个良好分离的相，含有蛋白质的有机相和含有总RNA的水相，中间相含有DNA。然后必须仔细回收水相，以避免无意收集中间相和有机相。用异丙醇进行沉淀RNA的步骤。然后用乙醇洗涤总RNA沉淀。然后将总RNA重新溶解于水中，并且必须在非常低的温度(-20℃且甚至更好-80℃)下储存。

为了仅获得低分子量RNA，可以使用含有纯化柱的试剂盒，诸如来自Sigma的试剂盒，mirPremier^TMmicroRNA分离试剂盒。这些试剂盒可以仅在实验室测试规模上使用，因为所讨论的体积为约为1mL，因此不能适应于大规模的产品开发。

另外，所有这些提取和纯化方案都无法使得可能获得纯化的核酸级分。该RNA或DNA或小RNA核酸级分将不含任何其他目标分子，诸如次级代谢物、维生素、糖、肽等，其可以对皮肤具有有益效果并因此具有美容益处。

此外，例如，文献WO8403835是已知的，其描述了用于获得富含纯DNA的植物胚芽的含水提取物的方法。这种方法值得注意地使用在含有蔗糖、EDTA(0.05M)和氯化钠的pH9.5的缓冲提取溶液中压碎的小麦胚芽和/或大豆胚芽。过滤之后，将残余物在环境温度下在搅拌下重新悬浮于补充有阴离子去污剂的pH7.4的缓冲盐水Tris溶液中，随后在0℃下在搅拌下添加高氯酸钠，并添加氯仿和辛醇，然后在低温(4℃)和非常高的速度(25,000g)下离心。回收基本上含有DNA的水相，其具有少量RNA和氨基酸，可以有利地对其使RNA酶起作用。

因此，该文献公开了使用非常大量的处理，包括用阴离子去污剂和不同溶剂(包括氯仿和辛醇，其可以在产物中留下毒性痕迹并且因此不能用于化妆品中)处理，获得特异性富含DNA的植物胚芽的含水提取物。

文献FR2831168也是已知的，其描述了用于从植物材料(特别是具有高DNA或RNA含量的植物胚芽或种子)获得富含核酸(DNA和/或RNA)的提取物的方法。该方法在于在水性介质中在纤维素分解酶存在的情况下在9至13(在几分钟内向中性演变的pH(这些酶的作用的最佳pH))的起始pH下提取植物材料，然后分离植物材料以回收含水提取物，最后用蛋白酶处理提取物并分离不溶性物质以回收纯化的含水提取物。因此获得的冻干产物可以特别含有0.1-1重量％的DNA，0.2-1.5重量％的RNA，以及碳水化合物、蛋白质、矿物质、维生素B和脂质。

具体而言，基于该文献中描述的数据，因此获得的冻干产物似乎含有1至10mg/L的DNA和10至75mg/L的RNA。

发明内容