[发明专利]用于改进的蛋白质分离的相反的pH-盐梯度

权利要求书

1.用于从蛋白质的混合物中分离和纯化蛋白质的方法，其通过以下步骤：

a）提供包含至少两种不同蛋白质的样品，

b）以≥5毫克/毫升、尤其≥30毫克/毫升、特别≥60毫克/毫升的总蛋白质负载将该混合物施加至离子交换材料，

c）通过特征在于同时改变pH和电导率的洗脱来分离所述蛋白质。

2.如权利要求1所述的用于从蛋白质的混合物中分离和纯化蛋白质的方法，其通过以下步骤：

a）提供包含至少两种不同蛋白质的样品，

b）将该混合物施加至离子交换材料，

c）通过递增的pH和递减的盐浓度来运行相反的pH-盐梯度以分离蛋白质，或相反运行递减的pH和递增的盐浓度，并且任选地

d）利用来自c）的分离数据限定和运行用于蛋白质分离的分步洗脱曲线。

3.如权利要求1或2所述的用于从蛋白质的混合物中分离和纯化蛋白质的方法，其通过以下步骤：

a）提供包含至少两种不同蛋白质的样品，

b）将该混合物施加至离子交换材料，

c）通过递增的pH和递减的盐浓度来运行相反的pH-盐梯度以分离蛋白质，或相反运行递减的pH和递增的盐浓度，并且

d）在梯度洗脱中分离所述蛋白质。

4.如权利要求1、2或3的一项所述的方法，其中总蛋白质负载为≥5毫克/毫升、尤其≥30毫克/毫升、特别≥60毫克/毫升。

5.如权利要求1至4的一项或多项所述的方法，其中蛋白质的混合物吸附或结合到离子交换材料上并从离子交换材料上洗脱。

6.如权利要求1至4的一项或多项所述的方法，其中蛋白质的混合物吸附到阴离子或阳离子交换材料上并从阴离子或阳离子交换材料上洗脱。

7.如权利要求1、2或3所述的方法，其中蛋白质的混合物吸附或结合到混合模式色谱材料上并从混合模式色谱材料上洗脱。

8.如权利要求1、2或3所述的方法，其中在c）中pH在4.5-10.5范围内变化且盐浓度在0-1 M盐范围内改变。

9.如权利要求1、2或3所述的方法，其中通过施加调节至pH 5和9.5的缓冲体系产生pH梯度。

10.如权利要求1至9的一项或多项所述的方法，其中在0-0.25 M的浓度范围内产生盐梯度。

11.如权利要求1至10的一项或多项所述的方法，其中通过施加至少两种缓冲溶液的缓冲体系来产生pH梯度，由此在一种缓冲溶液的存在下发生蛋白质的吸附或结合，并且在渐增浓度的另一缓冲溶液的存在下发生洗脱，而pH值递增且盐浓度同时递减。

12.如权利要求1至10的一项或多项所述的方法，其中通过施加至少两种缓冲溶液的缓冲体系来产生pH梯度，由此在一种缓冲溶液的存在下发生蛋白质的吸附或结合，并且在渐增浓度的另一缓冲溶液的存在下发生洗脱，而pH递减且盐浓度同时递增。

13.如权利要求1至12的一项或多项所述的方法，其中通过使用MES、MOPS、CHAPS等等的缓冲体系以及使用氯化钠的电导率改变体系来产生pH梯度。

14.如权利要求1至13的一项或多项所述的方法，其中蛋白质的混合物吸附或结合到阳离子交换材料上。

15.如权利要求1至13的一项或多项所述的方法，其中蛋白质的混合物吸附或结合到阴离子或混合模式色谱材料上。

16.如权利要求1至15的一项或多项所述的方法，其中蛋白质，特别是单克隆抗体（mAB）从其相关的电荷变体、糖基化变体和/或可溶性尺寸变体、二聚体和聚集体、单体、2/3片段、¾片段、一般片段、抗原结合片段（Fab）和可结晶片段（Fc）中分离和纯化。