[发明专利]组织样本中药物结合分析的方法

权利要求书

1.一种使用置换竞争性抑制确定配体与组织样本中的结合位点可逆结合的特异性结合的方法，所述方法包括在第一组织样本上在不存在标记配体的情况下孵育未标记的配体，在第二组织样本上在存在标记配体的情况下孵育所述未标记的配体，所述第一组织样本和所述第二组织样本是样本的相邻切片；随后使用MALDI质谱成像分别在所述第一组织样本和所述第二组织样本中可视化未标记配体的定位，其中所述未标记配体和标记配体是同系物，特异性地结合到相同的结合位点上。

2.根据权利要求1的方法，其中所述标记配体是同位素标记配体。

3.根据权利要求2的方法，其中所述同位素标记配体是氘标记配体或¹³C-同位素标记配体。

4.根据前述权利要求中任一项的方法，其中在置换竞争性抑制过程中，所述标记配体的摩尔浓度比所述未标记配体的摩尔浓度高。

5.根据权利要求1的方法，其中在置换竞争性抑制过程中，所述标记配体的摩尔浓度是所述未标记配体的摩尔浓度的5至10000倍。

6.根据权利要求2的方法，其中所述未标记配体具有纳摩尔的浓度，所述同位素标记配体具有微摩尔的浓度。

7.根据权利要求2的方法，其中靶蛋白的所述定位与所述同位素结合通过共定位确认。

8.根据权利要求1的方法，其中未标记配体和/或标记配体使用MALDI质谱成像进行定量。

9.根据权利要求1的方法，包括在组织样本的相邻切片上将所述未标记配体与至少两个不同浓度的标记配体一起孵育。

10.根据权利要求9的方法，其中所述方法包括使用不同的标记配体浓度进行滴定。

11.根据权利要求9或10的方法，其中从结合数据计算所述配体和/或代谢物和/或靶受体的动力学结合特性。

12.根据权利要求11的方法，其中所述动力学结合特性为K_d、K_i和/或IC50。

13.根据权利要求1的方法，其中首先在一个时间点将所述未标记配体添加到所述第二组织样本中，并且随后的时间在第二时间点添加所述标记配体。

14.根据权利要求1的方法，其中所述未标记配体是维罗非尼，并且所述标记配体是¹³C-维罗非尼。