[发明专利]用于基因转移和基因治疗的腺病毒复合物

说明书

本发明涉及可以通过靶向神经降压肽受体来用于基因转移和基因治疗的腺病毒复合物。本发明的复合物由于高的细胞内基因转移效率和由神经降压肽受体特异性结合产生的靶特异性从而具有优异的抗肿瘤效果，几乎没有肝毒性和免疫原性，形成稳定的复合物，具有低免疫原性，并因此即使在体内环境中在血液中也具有低的损失。因此，本发明的复合物可以有效地用于基因治疗。

技术领域

本发明涉及可以通过靶向神经降压肽受体来用于基因递送和基因治疗的腺病毒复合物。

背景技术

已知胰腺癌是非常具有侵袭性的、恶性的并且难以治愈。尽管胰腺癌的发病率低于其他癌的发病率，但胰腺癌是由癌症引起死亡的第四大常见原因^[1]。根据美国国家癌症研究所(U.S.National Cancer Institute)的报告，由于胰腺癌是非特异性的，具有出现较晚的早期症状，并且在早期转移，因此在2002年至2008年期间所有诊断为胰腺癌的患者的5年存活率为5.8％，并且几乎所有患者中的90％在诊断后一年内死亡。因此，患有胰腺癌的患者的预后非常差^[2，3]。

用于治疗胰腺癌的常规方法(包括免疫疗法、化学疗法和放射疗法)的不良的预后是由于细胞外基质(extracellular matrix，ECM)的异常和过度形成，其诱导肿瘤细胞周围非常高的结缔组织形成^[4-7]。在胰腺癌中，整个肿瘤体积的几乎90％由胰腺基质和ECM组成，并且充当治疗剂有效分散到肿瘤组织中的第一个障碍^[8]。此外，最近的研究显示ECM促进成分例如I型胶原蛋白成为肿瘤生长、耐药性和转移的促进因子^[9，10]。由于常规疗法在胰腺癌治疗中的这样的障碍和限制，因此需要通过靶向ECM以改善胰腺癌治疗的临床结果来减轻胰腺癌的新的治疗方式。

由于优异且有效的体内基因递送，腺病毒(Ad)介导的基因治疗是一种有前景的癌症治疗策略，其已得到论文的充分证明。特别地，溶瘤腺病毒(oncolytic adenovirus，oAd)具有用于癌症基因治疗的有利特征，例如肿瘤中的自体增殖、被感染的癌细胞的裂解和邻近细胞的继发性感染。oAd表达基因疗法已被广泛研究，因为它能够通过靶位点中的病毒复制诱导特定基因的癌症选择性表达和扩增以及癌细胞的继发性感染。然而，仅用野生型Ad(裸Ad)，在广泛扩散的晚期转移癌的治疗中存在显著的限制。为了完全移除在宿主中广泛扩散的癌症，需要全身性Ad施用，但是这样的方法面临主要障碍。特别地，裸Ad具有高免疫原性并诱导相当大的抗病毒免疫应答，从而使得利用Ad特异性中和抗体(Ab)和其他血液成分例如血小板和红细胞快速从血液中除去Ad^[13]。此外，αVβ5-和凝血因子X介导的Ad摄取到库普弗细胞和肝细胞两者中导致Ad在肝中的非特异性吸收、低肿瘤靶效率和严重的肝毒性^[14，15]。为了克服oAd用于临床治疗的限制，需要组合病毒和非病毒载体的特别设计的Ad混合系统^[18，19]。

病毒载体和非病毒载体的组合可分为涉及物理作用或化学缀合的两种类型的方法。两种方法均可以用于降低免疫原性并隐藏Ad天然向性，这在体内是有利的^[20]。然而，由于阳离子聚合物与阴离子血清蛋白之间的非特异性电荷相互作用，因此物理结合的Ad纳米复合物对于全身施用是不理想的，这可能引起血液中的快速降解和结构不稳定，从而促进凝聚^[21]。化学缀合的Ad可形成更稳定的纳米复合物，其可以耐受血液循环，隐藏肝组织的Ad的天然向性，并且因此可以降低抗病毒免疫应答。

作为一个值得注意的实例，Ad的PEG化自20世纪90年代末以来已被用于保护Ad免受蛋白质水解和宿主免疫应答^[23-26]。然而，通过PEG的这样的保护方法可阻断Ad有效内化到宿主细胞中，因为内源性纤维的掩蔽可以抑制与CAR相互作用，从而降低Ad进入效率^[18，21]。