[发明专利]确定体内相互作用模式的方法

权利要求书

1.一种确定人IgG1亚类的抗体与多聚体抗原的结合相互作用的方法，包括以下步骤：

1)确定抗体对多聚体抗原的结合亲和力，

2)在还原剂存在下，在30℃至42℃的温度下，将包含抗体、抗原和牙龈红棕色单胞菌的赖氨酸-牙龈菌蛋白酶或其酶活性片段的混合物在7.5至8.5的pH下温育10min至240min时间以将抗体切割成Fab和Fc区，其中抗体的浓度高于抗原的浓度，并确定抗体的Fab对于多聚体抗原的结合亲和力，

和

如果在两个步骤中确定的结合亲和力相当，则确定抗体对多聚体抗原的结合亲和力是亲和力驱动的，并且如果在两个步骤中确定的结合亲和力不同，则抗体对多聚体抗原的结合亲和力是亲合力驱动的，其中

如果在两个步骤中确定的结合亲和力相差2倍或更小，其中较小的值用作计算的基础且设定为100％，则在两个步骤中确定的结合亲和力相当，以及如果在两个步骤中确定的结合亲和力相差超过2倍，其中较小的值设定为100％，则在两个步骤中确定的结合亲和力不同。

2.根据权利要求1所述的方法，其中使用ELISA或表面等离振子共振方法在溶液中确定所述结合亲和力。

3.根据权利要求1所述的方法，其中利用FACS或细胞效应使用细胞测定来确定所述结合亲和力。

4.一种选择用于确定人IgG1亚类的抗体与多聚体抗原的结合相互作用的测定形式的方法，包括以下步骤：

1)使用表面等离振子共振方法确定抗体对多聚体抗原的结合亲和力，

2)在还原剂存在下，在30℃至42℃的温度下，将包含抗体、抗原和牙龈红棕色单胞菌的赖氨酸-牙龈菌蛋白酶或其酶活性片段的混合物在7.5至8.5的pH下温育10min至240min时间以将抗体切割成Fab和Fc区，其中抗体的浓度高于抗原的浓度，并在表面等离振子共振方法中通过直接应用前一步骤中获得的温育的反应混合物，利用表面等离振子共振测定抗体的Fab对其抗原的结合亲和力，

由此抗体对多聚体抗原的结合亲和力i)如果在两个步骤中确定的结合亲和力相当，则是亲和力驱动的，或ii)如果在两个步骤中确定的结合亲和力不同，则是亲合力驱动的，其中如果在两个步骤中确定的结合亲和力相差2倍或更小，其中较小的值用作计算的基础且设定为100％，则在两个步骤中确定的结合亲和力相当，以及如果在两个步骤中确定的结合亲和力相差超过2倍，其中较小的值设定为100％，则在两个步骤中确定的结合亲和力不同；

和

选择

i)在与可溶性多聚体抗原发生亲和力驱动的相互作用的情况下，进行溶液测定，

ii)在与可溶性多聚体抗原发生亲合力驱动的相互作用的情况下，进行溶液或表面测定，

iii)在与表面结合的抗原发生亲和力驱动的相互作用的情况下，进行溶液测定，或

iv)在与表面结合抗原发生亲合力驱动的相互作用的情况下，进行表面测定

用于确定人IgG1亚类抗体与多聚体抗原的结合相互作用。

5.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中如果在步骤1)和2)中确定的结合亲和力相差2倍或更少，其中较小的值用作计算的基础，则在两个步骤中确定的抗体对多聚体抗原的结合亲和力相当，并且如果在两个步骤中确定的结合亲和力相差超过2倍，其中较小的值设定为100％，则结合亲和力不同。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述结合亲和力是用10或更高的抗体:多聚体抗原比率确定的。

7.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中牙龈红棕色单胞菌的赖氨酸-牙龈菌蛋白酶包含SEQ ID NO：02或SEQ ID NO：03或SEQ ID NO：04的氨基酸序列。

8.根据权利要求1至4中任一项所述的方法，其中所述牙龈红棕色单胞菌的赖氨酸-牙龈菌蛋白酶具有至少包含SEQ ID NO：01的第230至739位残基的氨基酸序列。