[发明专利]在具有降低的CLR1活性的丝状真菌中生产蛋白质的方法

权利要求书

1.在丝状真菌中生产重组多肽的方法，所述丝状真菌经遗传修饰以与不具有该遗传修饰且与被遗传修饰的丝状真菌在相同条件下培养的丝状真菌相比降低或消除纤维素酶调节物1(CLR1)的活性，并且该丝状真菌被进一步遗传修饰以表达所述重组多肽，其中所述重组多肽在不能被CLR1活化的启动子的控制下表达，所述方法包括：

(i)在不含纤维素或其能够诱导CLR1活性的任何衍生物的培养基中生长所述经遗传修饰的丝状真菌；和

(ii)从培养基中分离重组多肽。

2.如权利要求1所述的方法，其中丝状真菌是嗜热毁丝霉(Myceliophthorathermophila)。

3.一种丝状真菌嗜热毁丝霉，其经遗传修饰以与不具有该遗传修饰且与被遗传修饰的丝状真菌在相同条件下培养的丝状真菌相比降低或消除纤维素酶调节物1(CLR1)的活性，并且该丝状真菌被进一步遗传修饰以表达重组多肽，其中所述重组多肽在不能被CLR1活化的启动子的控制下表达。

4.如权利要求1或2所述的方法或如权利要求3所述的丝状真菌，其中所述重组多肽是对丝状真菌异源的多肽。

5.如权利要求1、2或4中任一项所述的方法或如权利要求3或4所述的丝状真菌，其中所述重组多肽是水解酶。

6.如权利要求1、2、4或5中任一项所述的方法或如权利要求3至5中任一项所述的丝状真菌，其中所述遗传修饰的丝状真菌能够以比不具有该遗传修饰且与被遗传修饰的丝状真菌在相同条件下培养的丝状真菌更高的纯度积累重组多肽。

7.如权利要求1、2或4至6中任一项所述的方法或如权利要求3至6中任一项所述的丝状真菌，其中所述CLR1活性的降低或消除归因于减少或消除编码CLR1蛋白的核酸分子的表达。

8.如权利要求7所述的方法或丝状真菌，其中所述编码CLR1蛋白的核酸分子包含选自以下的核酸序列：

(a)根据SEQ ID No.1或2的核酸序列或其功能部分；

(b)编码根据SEQ ID No.3的多肽或其功能部分的核酸序列；和

(c)编码具有CLR1活性的多肽且与根据SEQ ID No.1或2的核酸序列具有至少70％序列同一性的核酸序列。

9.如权利要求1、2或4至8中任一项所述的方法或如权利要求3至8中任一项所述的丝状真菌，其中所述丝状真菌包含至少一种额外的遗传修饰。

10.如权利要求9所述的方法或丝状真菌，其中所述至少一种额外的遗传修饰降低或消除转录因子和/或蛋白酶的活性。

11.如权利要求10所述的方法或丝状真菌，其中所述转录因子是木聚糖酶调节物1(XYR1)。

12.如权利要求10或11所述的方法或丝状真菌，其中蛋白酶是碱性蛋白酶1(ALP1)。

13.降低或消除CLR1活性的核酸构建体的用途，用于增加丝状真菌中产生的重组多肽的纯度和/或量。

14.如权利要求13所述的用途，其中CLR1的活性通过减少编码CLR1蛋白的核酸分子的表达而降低。

15.如权利要求13或14所述的用途，其中编码CLR1蛋白的核酸分子包含选自以下的核酸序列：

(a)根据SEQ ID No.1或2的核酸序列或其功能部分；

(b)编码根据SEQ ID No.3的多肽或其功能部分的核酸序列；和

(c)编码具有CLR1活性的多肽且与根据SEQ ID No.1或2的核酸序列具有至少70％序列同一性的核酸序列。

16.权利要求3至12中任一项所述的丝状真菌的用途，用于生产重组多肽。