[发明专利]用于检测单核苷酸多态性的试剂盒和方法

说明书

本发明涉及用于检测单核苷酸多态性的试剂盒和方法，更特别地，涉及通过使用等位基因特异性双向引物延伸方法检测单核苷酸多态性的试剂盒和方法。

技术领域

本发明涉及用于检测DNA的试剂盒和方法，更具体地涉及用于检测单核苷酸多态性的试剂盒和方法。

背景技术

由于完成了人类基因组(genome)图，已经提出可以更广泛地实现疾病的预测，疾病的诊断和预后以及对药物响应的预测。近年来，已经揭示了多种基因的功能。由于已经鉴定了多种基因的功能，所以例如可以通过分析人体中某基因的突变来预测发生疾病的风险程度，由此可以预先预防疾病。此外，通过对在活生物体中造成感染的感染原(例如病毒)的基因突变分析，可以分析对某治疗药物具有抗性的病毒。通过上述基因型分析，可以预测感染原对特定治疗药物的响应，例如抗性响应，由此可以开发针对个体患者的个性化治疗方法。当将新的PCR技术应用于作为这样的个性化医疗和伴随诊断之核心技术的单核苷酸多态性(SNP；single nucleotide polymorphism)分析以分析SNP时，可以解决例如在根据患者的基因型的个性化医疗和用于确定药物效力的伴随诊断中现有PCR和NGS(下一代测序(Next Generation Sequencing))的局限性、对昂贵分析系统的需求以及在分析之前消耗大量时间的问题。特别地，现有的PCR(例如基于AS-PCR)等具有诸如难以分析杂合(heterotype)点突变的局限性，而使用TaqMan探针等的实时PCR具有由于光源和荧光物质的局限性而使得分析通道(channel)受限并且难以开发即时检验(point-of-care-testing，POCT)装置的缺点。下一代测序(NGS)需要高分析成本、昂贵的系统和复杂的过程，耗时而且还不能应用于POCT。

发明内容

技术课题

为了解决包括上述问题在内的多种问题而完成了本发明，本发明的目的在于提供用于检测单核苷酸多态性的新试剂盒和方法，其易于开发成为即时检验(POCT)装置。然而，应该理解的是，该目的仅仅是说明性的，并且本发明的范围不限于上述目的。

解决课题的手段

根据本发明的一个方面，提供了用于检测单核苷酸多态性的试剂盒，其包含：

i)单核苷酸多态性特异性正向引物，其包含：在PCR条件下不与靶核酸杂交的5'端标签寡核苷酸；以及单核苷酸多态性特异性寡核苷酸，其能够与所述靶核酸特异性杂交，并且在其3'端具有对于所述单核苷酸多态性的等位基因有特异性的核苷酸；

ii)用于扩增所述靶核酸的反向引物；以及

iii)延伸引物，其包含：在PCR条件下不与所述靶核酸、单核苷酸多态性特异性正向引物和反向引物中的任一个杂交的延伸多核苷酸；以及标签寡核苷酸。

根据本发明的另一方面，提供了用于检测单核苷酸多态性的试剂盒，其包含：

i)单核苷酸多态性第一等位基因特异性正向引物，其包含：在PCR条件下不与靶核酸杂交的5'端第一标签寡核苷酸；以及单核苷酸多态性第一等位基因特异性寡核苷酸，其能够与所述靶核酸特异性杂交，并且在其3'端具有对于所述单核苷酸多态性的所述第一等位基因有特异性的核苷酸；

ii)单核苷酸多态性第二等位基因特异性正向引物，其包含：在PCR条件下不与所述靶核酸和第一标签寡核苷酸杂交的5'端第二标签寡核苷酸；以及单核苷酸多态性第二等位基因特异性寡核苷酸，其能够与所述靶核酸特异性杂交，并且在其3'端具有对于所述单核苷酸多态性的所述第二等位基因有特异性的核苷酸；

iii)用于扩增所述靶核酸的通用反向引物；以及